¿Qué significa RT-PCR en tiempo real?
Reacción en cadena de polinucleótidos cuantitativa de fluorescencia en tiempo real
PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real
Abreviatura extranjera RT PCR
La tecnología de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real se refiere al método de agregar grupos fluorescentes al sistema de reacción de PCR, utilizar la acumulación de señales de fluorescencia para monitorear todo el proceso de PCR en tiempo real y, finalmente, analizar cuantitativamente la plantilla desconocida a través de la curva estándar. .
La PCR (PCR Cuantitativa en Tiempo Real) es un método que utiliza químicos fluorescentes para medir la cantidad total de producto después de cada ciclo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en la amplificación de ADN. Utilice el método de referencia interno o. el método de referencia externo para analizar cuantitativamente la secuencia de ADN específica en la muestra a analizar.
La PCR en tiempo real detecta el progreso de la amplificación por PCR en tiempo real a través de la señal de fluorescencia durante el proceso de amplificación por PCR. En fase exponencial, existe una relación lineal entre el valor Ct de la plantilla y el número de copias inicial de la plantilla, por lo que se convierte en una base cuantitativa.
Tecnología patentada
La fluoresceína-. La sonda Taqman marcada se combina con Después de mezclar el ADN molde, se completa un ciclo térmico de desnaturalización a alta temperatura, renaturalización a baja temperatura y extensión de temperatura adecuada. Se corta la sonda Taqman complementaria al ADN molde y se extrae la fluoresceína. libre en el sistema de reacción y fluorescente bajo excitación de luz específica con el ciclo A medida que aumenta el número de veces, el fragmento del gen diana amplificado aumenta exponencialmente. Al detectar la intensidad de la señal de fluorescencia correspondiente que cambia con la amplificación en tiempo real, el valor de Ct puede ser. obtenido al mismo tiempo, utilizando varias muestras estándar con concentraciones de plantilla conocidas como controles, se puede obtener el valor de Ct. El número de copias del gen objetivo en la muestra que se va a analizar.