Método de la Farmacopea USP: ¿Se pueden comprar microorganismos sin cepas de la ATCC?
En el tercer borrador de la Farmacopea "Directrices 9203 para la gestión de la calidad de los laboratorios de microbiología farmacéutica", bajo el elemento "Bacterias", hay una frase: "Las bacterias de prueba utilizadas para las pruebas de microbiología de medicamentos deben provenir de laboratorios reconocidos". laboratorios nacionales." O usar cepas estándar de instituciones de recolección de cultivos extranjeras, o usar cepas trazables derivadas comercialmente que sean equivalentes a todas las características relevantes de las cepas estándar". Esta frase establece los principios de la Farmacopea China para seleccionar cepas para las pruebas. Parece que se pueden utilizar CMCC (Centro de Colección de Cultivos de Microbiología Médica China), ATCC (Colección Americana de Cultivos Tipo), Centro NCTC (Colección Británica de Cultivos Tipo), etc. , un proveedor me recomendó cepas del CICC (Centro de recolección de microbiología industrial de China). Pero como empresa que sigue la Farmacopea China, las cepas bajo los límites microbianos y los elementos de inspección de esterilidad de la Farmacopea China establecen claramente que solo se pueden usar cepas CMCC, por lo que no hay necesidad de desafiar a la autoridad si usa bacterias de ATCC. El inspector le preguntará sobre la diferencia entre ATCC y CMCC. Creo que la gente de nuestro nivel no puede explicarlo claramente. Este proyecto es una investigación realizada por CCIC, por lo que no aceptaremos ese desafío. Simplemente elija el CMCC. cepa que se ajuste a las condiciones nacionales de mi país, eliminando una serie de explicaciones sin sentido.
Por supuesto, los productos de algunas empresas deben exportarse y deben cumplir con los estándares de la farmacopea del país exportador. Los países extranjeros son relativamente más relajados, pero algunos países no reconocen nuestras cepas CMCC. En mi experiencia laboral, descubrí que los funcionarios de auditoría nacionales saben muy poco sobre los microorganismos. Sin embargo, cuando nuestra empresa invitó a un experto extranjero de alto nivel a venir a nuestra empresa para una auditoría integral, echó un vistazo a las especies de bacterias ambientales que detectamos. Al decirlo, me sorprendió mucho. No sé si hay una cierta brecha entre el énfasis de los países extranjeros en los microorganismos y nuestro país o algo así. Su farmacopea también tiene más de una selección de cepas para probar y el alcance del reconocimiento. Más ampliamente. Ahora en el proceso de revisión, nuestro laboratorio de microbiología se trata más de explicaciones que de discusiones. También esperamos que haya más profesores que sepan sobre microorganismos en el equipo de inspección nacional para ayudarnos y guiarnos.
2. Gestión de cepas bacterianas para pruebas
Nuestro laboratorio también ha pasado por muchas idas y venidas en la gestión de cepas bacterianas. El modelo de gestión actual y los resultados de su uso son. Todavía bastante impresionante. Satisfecho, lo más temido de la bacteria es que su vitalidad se desvanezca o mute. El modelo de gestión de algunas empresas extranjeras es realmente muy conveniente. Los experimentos directos que utilizan cepas cuantitativas pueden no ser adecuados para la mayoría de nuestras empresas nacionales ahora, porque las cepas cuantitativas que utilizan son fabricadas y suministradas por empresas extranjeras autorizadas como ATCC. Muy conveniente, especialmente el producto principal de la familia M, no diré más para evitar sospechas publicitarias. Personalmente todavía tengo reservas sobre las tensiones cuantitativas que han surgido en China. Cuando salgo a capacitarme, todavía descubro que muchas empresas nacionales tienen ciertos problemas con los métodos de manejo de cepas bacterianas, especialmente los métodos de conservación, y de vez en cuando todavía ocurren incidentes de muerte y mutación de cepas bacterianas. A continuación, presentaré el modelo de gestión de cepas de nuestra empresa y presentaré dos métodos más convenientes de conservación de cepas.
La mayoría de las empresas tienen los siguientes siete tipos de cepas estándar en la farmacopea: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Clostridium sporogenes, Candida albicans, Black Aspergillus, compramos estas cepas al final de cada año según el período de conservación. Lo que compramos son cepas de reserva estándar que caducan el próximo año. Es posible que tenga preguntas aquí. ¿Por qué solo tenemos cepas de reserva estándar? Esto se debe a que solo compramos cepas estándar de CMCC, que son cepas de generación 0, y solo conservamos las cepas de reserva estándar de 1 generación recuperadas de la generación 0. 1 Las cepas de segunda generación que han sido resucitadas a partir de las cepas de reserva estándar pueden evitar en la mayor medida la ocurrencia de eventos de viabilidad y mutación porque el laboratorio no tiene la energía para lidiar con estos asuntos a diario, por lo que en la décima. edición de la Farmacopea, reajustamos el modelo de gestión. Después de un tiempo, todo el proceso es compra de cepas → aceptación de cepas → confirmación de cepas → preservación de cepas → recolección de cepas → uso de cepas → destrucción de cepas.
1) Compra de cepas
La compra de cepas para pruebas debe ser presentada por el responsable de las cepas para pruebas, revisada por el responsable de la sala de positivos y aprobada por el departamento. gerente antes de la compra. El personal de compras de la empresa debe confiar en los pedidos firmados y aprobados antes de poder comprar cepas. Después de todo, esto está relacionado con cuestiones de bioseguridad, por lo que la compra debe ser cautelosa.
2) Aceptación de la cepa
Se debe confirmar cada ampolla entrante de generación 0. El laboratorio debe realizar al menos experimentos de morfología de colonias y tinción de Gram. Si es posible, se deben confirmar métodos bioquímicos u otros. la especie. Este experimento es para confirmar la pureza, vitalidad y características de la cepa. Estamos confirmando la cepa de reserva estándar de primera generación después de la recuperación, es decir, la cepa que hemos conservado, para garantizar la calidad de la cepa conservada.
3) Preservación de la cepa
De hecho, la conservaremos al mismo tiempo que la confirmación. Si se confirma que no está calificada, el lote de cepas conservado será destruido. El método de conservación de nuestro laboratorio es muy simple y también se basa en el método de conservación que mi líder trajo de la capacitación en el Instituto de Supervisión de Calidad, Inspección y Cuarentena en 2008-09, que consiste en utilizar un medio de cultivo líquido. para resucitar el líquido bacteriano, luego agregue una cantidad igual de 20% de glicerol para hacer una suspensión bacteriana que contenga 10% de glicerol, luego empaquete en 1 ml/tubo y puede almacenarse durante 2 años. Sin embargo, para Aspergillus niger, conservamos la espora. suspensión y conservarlo por debajo de -15°C. El período de validez es de 1 año.
Hoy en día, muchos laboratorios utilizan el método de perlas magnéticas para la conservación y consideran que el efecto es bueno. Se almacena a 2-8 ℃ después de la conservación y tiene un período de validez de 1 año.
Ambos métodos tienen sus propias ventajas y desventajas. El método de congelación con glicerol utiliza un tubo para cada experimento y no lo reutiliza, evitando los desafíos de la congelación y descongelación repetidas de las cepas y la contaminación introducida por la apertura repetida de las mismas. tubos; sin embargo, el método de las perlas magnéticas se colocan varias perlas magnéticas en un tubo de solución de conservación. Cada vez que se utiliza, se retira una perla del tubo para su recuperación. Las operaciones repetidas pueden introducir contaminación, pero su ventaja es que la Los requisitos de temperatura para el refrigerador no son altos, y la mayoría de los laboratorios pueden cumplir con este requisito de refrigerador de 2 a 8 ℃, y los crioviales de glicerina requieren un congelador para su almacenamiento, por lo que para los laboratorios que no tienen una garantía de temperatura inferior a -15 ℃, se necesita el equipo correspondiente. a adquirir, esto es para que cada laboratorio lo evalúe y seleccione.
Todavía no recomiendo usar slants aquí. Debe transferirse una vez cada mes o dos. Hay muchas cosas diarias y la confirmación de las cepas está en el proceso de aprobación.