Métodos de detección de positividad para el VPH
Hasta la fecha, el VPH es difícil de detectar mediante cultivos virales tradicionales y técnicas serológicas, y la principal técnica de diagnóstico experimental es la hibridación de ácidos nucleicos.
1. Examen histopatológico: se ven queratinocitos y células huecas. Tasa de precisión 80-90.
2. Examen inmunohistoquímico del antígeno de la cápside anti-VPH: utilice anticuerpos policlonales producidos después de inmunizar animales con VPH para detectar antígenos del VPH tisular. El método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP) se usa comúnmente para mostrar proteínas virales en las verrugas genitales y demostrar que existen antígenos virales en las lesiones de las verrugas. Cuando la proteína del VPH es positiva, puede aparecer una reacción positiva débil de color rojo claro en las células epiteliales superficiales de las verrugas genitales. ) También existen PAAP, ley ABC, etc. Es positivo cuando se observan precipitados granulares de color marrón en los núcleos de las células vacuoladas; la tasa de detección es baja, la sensibilidad no es alta y el tipo no se puede clasificar. La tasa positiva es del 40 al 60%.
3. Diagnóstico genético:
3.1. Reacción en cadena de la polimerasa: El método de PCR desarrollado tiene las ventajas de especificidad, sensibilidad, simplicidad y velocidad, y ha abierto un nuevo camino para Detección del VPH. La detección del VPH mediante métodos de PCR es superior a los métodos de hibridación de ácidos nucleicos. Tiene alta sensibilidad si los resultados se analizan directamente mediante electroforesis en gel en el método GP-PCR, se pueden detectar 200 copias de ADN del VPH en la muestra. Si se utiliza la hibridación de ácidos nucleicos para detectar el producto de PCR, se mejora la sensibilidad. Se pueden detectar 10 copias del ADN del VPH.
Utilice un raspador o un hisopo de algodón empapado en solución salina para recolectar secreciones y células de la vagina y el orificio cervical externo. Mientras realiza el examen citológico, coloque la muestra en 5 ml de PBS que contenga 0,05 de timerosal, lávela dos veces con centrifugación en PBS (3000 g, 10 min), resuspenda las células sedimentadas en 1 ml de PBS y extraiga el ADN de 0,5 ml de la suspensión celular. .
En la detección por PCR se puede observar una zona específica de amplificación del ADN del VPH. En vista de la alta sensibilidad de la tecnología de PCR, el uso de células exfoliadas del tracto reproductivo como material de prueba es suficiente para cumplir con los requisitos de la prueba, evitando las complicadas operaciones de muestreo de biopsias y trituración de tejido. En circunstancias normales, el producto de amplificación por PCR se somete a electroforesis en gel y se puede observar el ADN resultante para realizar un diagnóstico directo. Por tanto, la tecnología PCR para detectar el VPH tiene un ciclo experimental corto, es sencilla y rápida. La desventaja es que no se puede localizar y no se sabe si el virus está vivo o muerto. Es probable que se produzcan falsos positivos. Puede seguir siendo positivo durante mucho tiempo después de la recuperación. La especificidad también disminuyó gradualmente.
3.2. Método de hibridación de ADN: tecnología de hibridación molecular HPVDNA. Como el método PCK. Inmunotinción de EGFR. Método de inmunotinción CP?14 (Leu?M3) (se pueden ver más de 3 puntos fluorescentes bajo un microscopio de fluorescencia a 400 veces, lo que significa que es positivo). Se puede tipificar, la hibridación de ácidos nucleicos puede detectar secuencias relacionadas con el ADN del VPH y la detección por PCR puede mostrar zonas de amplificación específicas del ADN del VPH. Pero es engorroso y caro. Se requieren ciertos equipos y condiciones.
4. Examen histoquímico: tomar una pequeña cantidad de tejido dañado para hacer un frotis y teñirlo con anticuerpos específicos del virus del papiloma humano. Si hay un antígeno viral en la lesión, se combinará antígeno-anticuerpo. En el método de peroxidasa-antiperoxidasa (PAP), los núcleos pueden teñirse de rojo. Este método es muy específico y rápido, y resulta útil para el diagnóstico.
5. Pruebas citológicas: utilice la tinción de Papanicolaou de frotis de tejido de verrugas para mostrar dos tipos de células, a saber, células vacuoladas y queratinocitos. Diagnosticable.
6. Método de prueba local: prueba de azul de toluidina: 1. Aplique azul de toluidina a la verruga o la piel normal circundante después del secado y luego use 1. ácido acético para decolorar. Aquellos que todavía están teñidos son positivos. Visto en pacientes con tumores o verrugas genitales.
7. Detección por microscopio electrónico de transmisión: la tasa positiva de queratinocitos es baja. 25-45. Se puede utilizar con colposcopia y examen con lupa.
8. Colposcopia: Se requiere asistencia con la prueba de blanqueamiento con ácido acético. Siempre que sea probado por una institución médica regular, generalmente es más preciso.