¿Qué es la prueba de anticuerpos específicos contra Treponema pallidum?

Método TPHA para detectar anticuerpos contra Treponema pallidum

1. Descripción general:

El Treponema pallidum existe en la sangre o el líquido cefalorraquídeo del paciente y se puede detectar in vitro en un laboratorio. Ambiente anaeróbico especial. Cultivo artificial. Los anticuerpos específicos contra Treponema pallidum se pueden detectar en la sangre 3-4 semanas después de que un paciente haya sido infectado con Treponema pallidum, y aún pueden detectarse durante mucho tiempo después del tratamiento. Se pueden detectar dos tipos de anticuerpos en el suero del paciente. Uno es un anticuerpo contra antígenos no treponémicos (es decir, un anticuerpo contra la cardiolipina bovina, como el RPR y algunos métodos domésticos de EIA y marcado con oro que detectan este anticuerpo no específico). Este tipo de anticuerpos se puede detectar durante la etapa activa de la enfermedad, pero disminuirá rápidamente después del tratamiento o después de que la enfermedad entre en la etapa crónica. El otro tipo son los anticuerpos específicos contra los antígenos de espiroquetas, que aún pueden detectarse durante mucho tiempo. tratamiento, manteniendo una respuesta de títulos altos incluso en la fase crónica de la enfermedad. La prueba OMEGA TPHA es una prueba de hemaglutinación pasiva, sensible y específica que detecta anticuerpos dirigidos contra antígenos treponémicos. Los estándares de calidad del kit OMEGA TPHA han sido aprobados por el Instituto Chino para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos.

2. Principio de la prueba:

Las células sanguíneas de prueba son glóbulos rojos de pollo aldehilados y curtidos recubiertos con antígeno específico de Treponema pallidum, y las células sanguíneas de control son aquellas sin el recubrimiento antigénico anterior. Glóbulos rojos de pollo formalizados y curtidos, si se trata de una muestra positiva, cuando se mezclan con glóbulos rojos de pollo sensibilizados, la combinación de anticuerpos y antígenos provocará la aglutinación de los glóbulos sensibilizados, formando aglutinación en el fondo de la placa de hemaglutinación. Si la muestra es negativa, las células sanguíneas forman un precipitado denso en el fondo del pocillo.

3. Composición del kit: Suspensión de células de prueba 8,5 ml Suero de control positivo 2 ml Diluyente 2 0 ml

Suspensión de células de control 8,5 ml Suero de control negativo 2 ml Gotero de células 2 Soporte

Todos los reactivos anteriores son concentraciones de trabajo. El suero de control negativo y positivo del kit se ha diluido 1:20 y se puede utilizar para experimentos directos sin dilución adicional. El título del control positivo es de aproximadamente 1:2560.

El volumen de gota del gotero de células es de 75ul por gota, donde el gotero rojo se usa para células sanguíneas sensibilizadas y el gotero blanco se usa para células sanguíneas de control.

Muestras a analizar: Se deben utilizar muestras de suero y muestras de líquido cefalorraquídeo. Las muestras de suero pueden almacenarse a -20°C, pero no deben conservarse durante más de 4 a 6 semanas. Las muestras no deben estar hemolizadas ni contener grasa. Se debe evitar que las muestras se mezclen con saliva, ya que de lo contrario se verá afectada la precisión de los resultados.

IV.Método de operación:

1. En la primera fila de la placa de reacción: añadir 25u (1 gota) de diluyente a cada pocillo.

En el primera fila de la placa de reacción Segunda fila: añadir 100ul (4 gotas) de diluyente a cada pocillo

En la tercera y cuarta filas de la placa de reacción: añadir 25ul (1 gota) de diluyente a cada pocillo

2. Tome 25ul de la muestra y agréguelos a la primera fila de agujeros.

3. Diluir la muestra de la siguiente manera: Use una pipeta de 25 ul para mezclar el líquido en la primera fila de pocillos después de agregar la muestra, luego saque 25 ul y agréguelo a la segunda fila de pocillos. mezcle bien. Tome otros 25 ul y agréguelos a los pocillos de la tercera fila. Después de mezclar, extraiga 25 ul de los pocillos de la tercera fila y deséchelos. a los pocillos de la cuarta fila. Después de mezclar, agréguelo de los pocillos de la tercera fila. Aspire 25 ul de la cuarta fila de agujeros y deséchelo.

4. Añadir 75 ul (1 gota) de suspensión de células de prueba a la cuarta fila de pocillos, y añadir 75 ul (1 gota) de suspensión de células de control a la tercera fila de pocillos. Agite suavemente la placa de reacción, cúbrala y déjela reposar durante 45 a 60 minutos antes de leer los resultados.

V. Juicio de Resultado:

1. Inspección visual: Cualquier aglutinación celular aparece como reacción positiva, y aquellas sin aglutinación es reacción negativa.

—/No aglutinante: las células se depositan en el centro de la placa bien en forma de botón con bordes lisos

±/Condensable: las células se depositan en el centro; de la placa bien en forma de anillo con bordes lisos

+/Aglutinación: Las células forman formación poligonal o deposición anular irregular;

2+—4+/Aglutinación fuerte: las células forman formas irregulares con bordes ásperos o una película que cubre el fondo de los pocillos.

2. No debe haber aglutinación en el pocillo de reacción donde se añaden las células sanguíneas de control. Si se produce aglutinación, indica la presencia de anticuerpos anticélulas sanguíneas y se debe repetir la prueba.

Al repetir la prueba, centrifugue a 1000 rpm durante 5 minutos, tome el sobrenadante y dilúyalo 1:5 con diluyente, y luego realice la prueba si aún se produce aglutinación después de agregar la suspensión de células de prueba, se puede considerar como un resultado positivo.

3. Determinación instrumental: Se puede utilizar el lector de microplacas Olympus PK7200 o Lebo MK3 mejorado.

6. Conservar a 4-8 ℃, no congelar. Tenga cuidado de no voltear el kit durante el transporte y almacenamiento