¿Qué es la amplificación PRC?

La PCR es una tecnología de amplificación de ADN in vitro que se basa en la reacción enzimática de la ADN polimerasa en presencia de un molde de ADN, cebadores y cuatro desoxinucleótidos, lo que hace que el fragmento de ADN que se amplifica se someta a múltiples "desnaturalizaciones a alta temperatura y recocidos a baja temperatura". La reacción de tres pasos de "extensión del cebador" aumenta exponencialmente el número de fragmentos de ADN, obteniendo así una gran cantidad de fragmentos de genes específicos que necesitamos en poco tiempo. En la detección ambiental, las secuencias de ácidos nucleicos diana a menudo existen en mezclas complejas, como extractos celulares, en niveles muy bajos, por lo que la hibridación no es sensible para detectar microorganismos o genes específicos en poblaciones tan complejas. La secuencia diana se puede amplificar en varios órdenes de magnitud mediante tecnología de PCR, y luego la secuencia amplificada se puede estudiar y analizar cualitativa o cuantitativamente mediante detección de hibridación de sonda. La tecnología PCR se utiliza a menudo en combinación con otras tecnologías, como RT-PCR, PCR competitiva, PCR de ranura, RAPf, ARDRA, etc. La RT-PCR no sólo detecta microorganismos no cultivados sino que también mide los niveles de transcripción de genes de ARNm. La PCR competitiva es un tipo de PCR cuantitativa. Al agregar un molde competitivo construido artificialmente con mutaciones al sistema de reacción de PCR y controlar la concentración del molde competitivo, se determina la concentración del molde objetivo y se estudia cuantitativamente el molde objetivo. La tecnología de PCR se combina con la tecnología de digestión con endonucleasa de restricción y la endonucleasa de restricción se utiliza para digerir el producto de amplificación por PCR del gen diana. Los polimorfismos genéticos se detectan mediante el análisis de los productos de la digestión. Rapd (ADN polimórfico amplificado aleatoriamente) también es una técnica muy utilizada. RAPD utiliza cebadores que no son específicos de un gen específico para amplificar algunos fragmentos. El análisis RAPD se utiliza para detectar la diversidad microbiana en varios biorreactores que contienen poblaciones microbianas mixtas. Las huellas dactilares genómicas obtenidas mediante el análisis RAPD son útiles para comparar cambios en las poblaciones microbianas a lo largo del tiempo y para comparar reactores a pequeña escala y piloto, pero no son suficientes para estimar la biodiversidad de la comunidad.

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