Preguntas sobre la tinción por inmunofluorescencia celular

(1) Su anticuerpo secundario está marcado con FITC. Para evitar la descomposición de la fluorescencia, evite la luz al empaquetar y observar con un microscopio de fluorescencia.

(2) El tampón de glicerol y bicarbonato de 0,5 mmol/L con un valor de pH de 9,0-9,5 es la mejor manera de sellar el portaobjetos y hacerlo transparente;

(3) Con respecto a la tinción con inmunoenzimas, si se usa peroxidasa para el marcado, la peroxidasa endógena debe eliminarse con H2O2 al 3% para desnaturalizar el ADN de modo que el anticuerpo Brdu pueda combinarse completamente con Brdu.

¿Cómo configurar el control de calidad para la tinción por inmunofluorescencia indirecta?

Opinión de referencia: Lo mejor es comparar los mismos campos de visión sin excitación de fluorescencia para ver si se trata de una tinción no específica.

(1) Control en blanco: si realiza inmunohistoquímica con sección de parafina, debe tener este control para ver la autofluorescencia y observarla directamente bajo un microscopio de fluorescencia después de la desparafinación.

(2) Control negativo: A la muestra se le añade directamente el anticuerpo secundario, que es negativo.

(3) Control de antígeno: Lavar la muestra con PBS y luego añadir anticuerpo fluorescente antiinmunoglobulina. Debido a que no hay anticuerpos específicos en el suero de animales no inmunes, debería ser negativo.