¿Cuáles son las técnicas comúnmente utilizadas para las pruebas inmunológicas?
A continuación se detallan varias técnicas inmunológicas comúnmente utilizadas:
1. Tecnología de inmunofluorescencia
La tecnología de inmunofluorescencia es un método que utiliza anticuerpos (o antígenos) marcados con fluoresceína para detectar los antígenos (o anticuerpos) correspondientes en tejidos, células o suero. Debido a que los anticuerpos fluorescentes son seguros y sensibles, se han utilizado ampliamente en los campos de la detección por inmunofluorescencia y la citometría de flujo. Según los diferentes métodos de marcado con fluoresceína, se puede dividir en anticuerpos fluorescentes marcados directamente y anticuerpos fluorescentes marcados intermediamente. En los anticuerpos fluorescentes intermarcados, el anticuerpo primario no está conectado directamente a la fluoresceína. En cambio, el anticuerpo primario se une primero a la proteína y luego el anticuerpo secundario con fluoresceína se une al anticuerpo primario. Mediante la unión de anticuerpos secundarios se puede amplificar la señal, mejorando así en cierta medida la sensibilidad de la detección, pero el alto fondo resultante también reduce la especificidad de la detección. En los últimos años, con el avance continuo de la fluoresceína y la tecnología de detección de fluorescencia, la sensibilidad de la detección de fluorescencia se ha acercado al nivel de la detección de isótopos y los anticuerpos fluorescentes marcados directamente han reemplazado gradualmente a los anticuerpos marcados indirectamente. Estos anticuerpos marcados con fluoresceína se unen directamente al antígeno, lo que mejora en gran medida la especificidad de la detección y hace que los resultados de la detección sean más precisos y fiables. El desarrollo de la tecnología de detección de fluorescencia ha hecho que la tecnología de inmunofluorescencia se utilice ampliamente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como la detección de anticuerpos IgM en enfermedades infectadas por bacterias, virus y espiroquetas como marcador de exposición reciente a antígenos. Identificación de subtipos de linfocitos mediante anticuerpos monoclonales fluorescentes marcados directamente. A través de la citometría de flujo, se pueden usar múltiples anticuerpos fluorescentes diferentes simultáneamente para diferentes antígenos en la superficie celular para realizar tinciones con múltiples etiquetas en las mismas células.
2. Radioinmunoensayo
La tecnología de inmunoensayo por radiación es actualmente la tecnología de detección más sensible. Utiliza isótopos radiactivos para marcar antígenos (o anticuerpos) y, después de combinarlos con los anticuerpos (o antígenos) correspondientes, se miden los conjugados antígeno-anticuerpo. Resultados de las pruebas de radiactividad. Los isótopos radiactivos tienen una sensibilidad de nivel pg y pueden detectar cuantitativamente trazas de sustancias utilizando métodos de exposición repetida. Sin embargo, el daño causado por los isótopos radiactivos al cuerpo humano también limita el uso de este método.
3． Enzimoinmunoensayo (ELISA)
El enzimoinmunoensayo es actualmente el método de inmunoensayo más utilizado. Este método consiste en marcar el anticuerpo secundario con una enzima y combinar la especificidad de la reacción antígeno-anticuerpo con la acción del sustrato catalizado por enzima. Los resultados de la prueba se juzgan en función del cambio de color después de que la enzima actúa sobre el sustrato. y su sensibilidad puede alcanzar el nivel ng. Las enzimas comúnmente utilizadas para el etiquetado incluyen peroxidasa de rábano picante (HRP), fosfatasa alcalina (AP), etc. Debido a que el inmunoensayo ligado a enzimas no requiere equipo especial y es fácil de detectar, se usa ampliamente en la detección de enfermedades. Los métodos comúnmente utilizados incluyen el método indirecto, el método sándwich y BAS-ELISA. El método indirecto consiste en recubrir primero la proteína que se va a analizar en una placa de pocillos, luego agregar el anticuerpo primario, el anticuerpo secundario marcado con enzima y el desarrollo del color del sustrato en secuencia, y detectar cuantitativamente el antígeno a través de un instrumento (como un lector de microplacas). Este método es sencillo de realizar pero tiene poca especificidad debido al alto nivel de fondo. Ha sido sustituido paulatinamente por el método sándwich. El método sándwich utiliza dos anticuerpos primarios para capturar e inmovilizar el antígeno objetivo, lo que mejora en gran medida la especificidad de la reacción al tiempo que garantiza la sensibilidad. En los últimos años se han desarrollado continuamente tecnologías de detección cuantitativa de antígenos. En los últimos años, basados en el ELISA tipo sándwich, se han desarrollado kits de detección de múltiples antígenos, que pueden detectar simultáneamente el contenido de múltiples antígenos en trazas de muestras líquidas. La aplicación de esta tecnología acorta enormemente el tiempo de diagnóstico y mejora la confiabilidad y puntualidad del diagnóstico.
4. Tecnología coloidal Immunogold
La tecnología del oro coloidal se ha vuelto cada vez más madura después de más de 30 años de desarrollo. Este método consiste en marcar el anticuerpo secundario con partículas de oro coloidal y utilizar la reacción específica entre el antígeno y el anticuerpo para finalmente. convertir el oro coloidal en El anticuerpo secundario marcado se adsorbe en la membrana de diafiltración. Este método es simple, rápido y ampliamente utilizado en la detección clínica.