¿Qué es el cultivo de tejidos de células vegetales?

Cultivo de tejido de células vegetales

1. ¿Cuál es el propósito del experimento?

El cultivo de células y tejidos vegetales es muy técnico y requiere un manejo estéril. A través de este experimento, podrá dominar las técnicas convencionales de cultivo de tejidos y profundizar su comprensión de las operaciones asépticas. ?

2. ¿Principio experimental?

Totipotencia de las plantas: Cualquier célula de una planta tiene la capacidad de crecer y diferenciarse hasta convertirse en una planta completa, lo que se denomina totipotencia vegetal. ?

El cultivo de tejidos vegetales es una tecnología que utiliza la totipotencia vegetal para cultivar plantas estériles in vitro. El cultivo de tejidos vegetales se refiere al cultivo de callos en su significado original. Pero hoy en día, su alcance se está ampliando cada vez más para incluir el cultivo estéril de plantas y sus órganos, tejidos, células y protoplastos aislados. Por lo tanto, existen varios niveles diferentes de técnicas de cultivo, a saber, técnicas de cultivo de todo el cuerpo, órganos, tejidos, células y protoplasma. Lo que quieren decir es:

1. Se refiere al cultivo estéril de explantes utilizando materiales morfológicos vegetales completos (como plántulas y plantas más grandes).

2.? Cultivo de embriones. Los embriones maduros o inmaduros separados de los óvulos se utilizan como explantes para cultivos estériles in vitro.

3.? Cultivo de órganos. Se refiere al cultivo estéril in vitro de raíces, tallos, hojas, flores, frutos y otros órganos como explantes, tales como puntas y secciones de raíces, puntas de tallos, nudos y secciones de tallos, primordios foliares, hojas, pecíolos, vainas foliares y cotiledones. , cultivo estéril de pétalos, estambres (anteras, filamentos), óvulos, ovarios, frutos, etc. de órganos florales.

4.Cultivo de tejidos. El cultivo in vitro estéril se refiere a tejidos aislados de diversas partes de la planta (como meristemo, cambium, xilema, floema, epidermis, corteza, tejido de endospermo, tejido de parénquima, médula, etc.). ) o callos inducidos como explantes. Este es un cultivo de tejidos en un sentido estricto.

5. Cultivo celular. Se refiere a un cultivo estéril aislado con células libres individuales (como células somáticas, células de polen y óvulos separados de los tejidos por uricasa) como inóculo.

6. Cultivo de protoplastos. Cultivo in vitro estéril en el que se utilizan como explantes protoplastos sin sus paredes celulares.

Este experimento utiliza tabaco y guisantes como materiales. El tabaco es una importante materia prima industrial y una de las cuatro plantas experimentales típicas (tabaco, petunia, zanahoria y brassica) en el cultivo de tejidos vegetales. Es el más estudiado y siempre está por delante de otros materiales vegetales. Actualmente, 16 de las 66 variedades de tabaco tienen plantas regeneradas. Doce especies regeneraron plantas de polen mediante cultivo de anteras, 20 especies regeneraron plantas mediante cultivo de protoplastos y 3 y 12 especies regeneraron híbridos mediante fusión de protoplastos intraespecíficos e interespecíficos de tabaco. El guisante (Pisum? Sativum) es una planta leguminosa y un importante cultivo alimentario, forrajero y de hortalizas. También es una planta experimental que los genetistas y fisiólogos vegetales están interesados ​​y dispuestos a utilizar. Los explantes de guisantes, como raíces, tallos, cotiledones, hipocótilos, epicótilos y botones florales, pueden formar tejido calloso, y órganos como puntas de brotes, embriones jóvenes y hojas jóvenes pueden regenerar plantas con éxito. Los cultivos de ápices de brotes pueden incluir meristemas de ápices de brotes (puntos de crecimiento) tan pequeños como diez micrones y tan grandes como decenas de milímetros o más. En la práctica, a menudo se cultivan cepas libres de virus en los puntos de cultivo para preservar las variedades finas y mejorar el rendimiento y la calidad.

3. ¿Materiales experimentales?

¿Instrumentos y equipos?

1. Lámpara de alcohol, matraz Erlenmeyer de 100 ml, placa de Petri de 9 cm

2. Pinzas, tijeras y aguja de disección

3.

4. Incubadora ligera o invernadero;

¿Materiales y reactivos?

1. Plántulas de tabaco y guisantes estériles.

2. Reactivos

(1) Medio MS, hormonas vegetales: NAA, 6-BA, etc.

(2) Solución saturada de polvo blanqueador (hipoclorito de sodio).

(3) 70 alcohol, 100 bolas de algodón con alcohol.

(4) Estéril; agua ?

4. ¿Pasos experimentales?

1. Propagación rápida por esqueje de plántulas de tabaco estériles - subcultivo: (¿requiere operación aséptica completa)?

Cada grupo dispone de un frasco de vacuna antitabaco estéril. Por favor manipúlelo con cuidado para evitar la contaminación. ?

(1) En el banco experimental, encienda la lámpara de alcohol, límpiese las manos con bolas de algodón con alcohol para desinfectar y abra el matraz Erlenmeyer que contiene las plántulas de humo esterilizadas. La boca del matraz Erlenmeyer debe quemarse y esterilizarse con la llama exterior de una lámpara de alcohol antes y después de su uso. ?

(2) Utilice pinzas esterilizadas para exprimir suavemente 1 plántula y utilice tijeras esterilizadas para cortar las plántulas esterilizadas en trozos de 0,5 a 1 cm. Cada pieza debe contener al menos un punto de crecimiento y cortar. directamente en un matraz Erlenmeyer que contiene medio MS. Cada pieza debe estar en contacto directo con el medio de cultivo, y la boca del matraz debe ser reesterilizada y sellada nuevamente. ?

(3) Después de cultivar durante 4 semanas en una incubadora ligera a 65438 ± 05 ~ 25 ℃ y 65438 ± 06 horas, se puede cultivar una planta completa y se puede utilizar para trasplante de campo. ?

2. ¿Cultivar las puntas de los tallos de las plántulas de guisantes?

⑴ Se toman las 65.438 00 plántulas de guisantes que han germinado durante 6 días, simplemente se toman las puntas del tallo de 65.438 0 cm, se remojan en alcohol al 70% durante 65.438 0 minutos, y luego se remojan y desinfectan con sodio saturado. solución de hipoclorito 438 05 minutos, enjuagar con agua esterilizada 5 veces (después de este paso se requiere esterilidad), absorber el agua con papel de filtro esterilizado y colocarla en una placa de Petri esterilizada. ?

⑵ Bajo un microscopio de disección binocular, use una aguja de disección esterilizada para pelar las hojas jóvenes y exponer los conos de crecimiento, y use una aguja de disección esterilizada para seleccionar los conos de crecimiento con primordios de dos o tres hojas. ?

⑶? ¿Mover las puntas del vástago seleccionadas a MS 10,7 μm ol/L NAA 4,4 μm ol/L? La formación de callos se indujo en medio de 6-benciladenina (6-BA) y la placa de cultivo se selló con una película sellante. ?

【4】Cultivar en una incubadora de temperatura constante a 26°C durante seis semanas para formar callos, que pueden usarse para enraizar el cultivo después del subcultivo.