¿Cuáles son las experiencias y lecciones aprendidas en el cultivo celular?

? En cuanto a los problemas de contaminación, incluidas las bacterias, los micoplasmas y otras contaminaciones y prevención, otras respuestas ya han dicho mucho, por lo que no entraré en detalles. Déjame contarte mi experiencia sobre cómo cultivar células hermosas: 1. El tiempo de operación debe ser lo más corto posible y los pasos de la operación deben ser lo menos posibles. Ya sea retirado de la incubadora, tripsinización, centrifugación, etc. , todas estas son tensiones para las células. Por lo tanto, es necesario acortar el tiempo total de la operación y reducir el número de pasos quirúrgicos. a) Para células fácilmente digeribles, no es necesario digerir las células hasta que estén flotando y centrifugar después de terminar la adición del medio. Cuando la digestión está casi completa, se puede eliminar la mayor parte de la tripsina y luego se puede agregar el medio de cultivo directamente para eliminar las células, eliminando el paso de centrifugación. La tripsina residual no tiene ningún efecto sobre las células debido a su bajo contenido. b) Para las células difíciles de digerir, recomiendo lavarlas una vez con PBS sin calcio y magnesio, agregar un poco más de tripsina y digerirlas a 37 grados hasta que se caigan (las células se caerán al agitarlas), luego añadir medio de cultivo y detener la centrifugación. La razón de esto es que la digestión celular incompleta inevitablemente aumentará la cantidad de desprendimiento asistido por soplado de aire. Cuantas más veces soples peor será la actividad celular.

? Vale la pena señalar que algunas células especiales no pueden utilizar la tripsina como solución digestiva. Por ejemplo, tengo una célula tumoral impulsada por el gen EGFRvIII y no contiene otras mutaciones genéticas de la vía de señalización del factor de crecimiento. Tras la digestión con tripsina, su morfología cambia drásticamente y tarda dos días en recuperarse. Experimentos adicionales demostraron que la tripsina escinde EGFRvIII (20 EGFRvIII mueren en 2 minutos a temperatura ambiente).