¿Cuál es la proteína más resistente al calor?
Nombre chino:
enzima lítica
Nombre en inglés:
enzima lítica
Otros Nombre:
Lisozima (lisozima)
Definición:
Nº: EC 3.2.1.17. Enzima presente en secreciones biológicas como la clara de huevo y la saliva que cataliza la hidrólisis del enlace 1,4-beta-glucosídico entre la N-acetilglucosamina y el ácido N-acetilmurámico en la pared celular bacteriana.
Disciplinas aplicadas:
Bioquímica y biología molecular (disciplina de primer nivel); Enzimas (dos disciplinas)
Lisozima, también conocida como muramidina o N-acetilmuramina. glicohidrolasa, una enzima alcalina que puede hidrolizar mucopolisacáridos en bacterias patógenas. El enlace glicosídico β-1,4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetilglucosamina en la pared celular se destruye, lo que hace que los mucopolisacáridos insolubles de la pared celular se descompongan en glicopéptidos solubles, lo que provoca que los fragmentos de la pared celular escapen y las bacterias se disuelvan. . La lisozima también puede unirse directamente a proteínas virales cargadas negativamente y formar sales dobles con ADN, ARN y apoproteínas, inactivando así el virus. Por tanto, la enzima tiene efectos antibacterianos, antiinflamatorios y antivirales.
Nombre chino: lisozima
Sinónimos chinos: enzima rompe paredes; enzima mureína (N-acetil mureína glucano lisozima (clara de huevo)
Nombre en inglés: lisozima, abreviado como LZM
Sinónimos en inglés: lisozima reducida, soluble en agua; mucopéptido-azúcar hidrolasa; mucopéptido N-acetil amoníaco; hidrolasa de grado ⅲ; mucopéptido N-acetilmuramilo hidrolasa de grado ⅵ: cloruro; lisozima de grado ⅲ[1]
card Snow. : 12650-88-3
EINECSNº. : 235-747-3[2]
Fórmula molecular: Ninguna
Peso molecular: alrededor de 14.000.
EINECSnúm. : 235-747-3
Categorías relacionadas: primera liberación; enzima; reactivo bioquímico;
Diagrama de estructura molecular:
Natural
Condiciones de almacenamiento: 2-8℃
Forma: polvo
Color: Blanco
Marca de Mercancías Peligrosas b
Instrucciones de Seguridad 23-24/25-22
WGK Alemán 3
RTECSno. OL5989850
F3-10
Polvo liofilizado blanco o blanquecino, soluble en agua, insoluble en éter y acetona, pI es 11,0-11,35, el valor de pH óptimo es 6,5.
Estabilidad: puede existir de manera estable en medios ácidos y se inactiva fácilmente en medios alcalinos; en condiciones de 96 ℃ y pH 3, la actividad enzimática aún permanece en 87% después de 65438 ± 05 minutos.
Inhibidores: derivados del yodo, imidazol, indol, tensioactivos (lauril sulfato sódico, alcoholes y ácidos grasos con una cadena carbonada no inferior a 12). El coeficiente de absorción de una solución acuosa al 1% a 281,5 nm es 26,4. Las bacterias se lisan hidrolizando el peptidoglicano de la pared celular bacteriana.
Reacciones enzimáticas: suspensión/disolución de bacterias y clarificación de Micrococcus luteus o Micrococcus lyticosa.
Usos: Utilizado para la investigación bioquímica y el tratamiento clínico de faringitis aguda y crónica, liquen plano, verrugas planas y otras enfermedades.
Esta parte de la producción del editor
Utiliza clara de huevo como materia prima, adsorbe con resina de intercambio catiónico débilmente ácida 732 con pH 6,5, eluye con sulfato de amonio, dializa y liofiliza. el producto.
Edite este párrafo para preparar
La lisozima es una enzima natural, un aditivo ecológico seguro y no tiene resistencia a los medicamentos.
Esta enzima se encuentra ampliamente en diversos tejidos del cuerpo humano. También se encuentra en las claras de huevos de aves y aves de corral, las lágrimas, la saliva, el plasma, la orina, la leche y otros fluidos corporales y en los microorganismos de. mamíferos Entre ellos La clara de huevo es la más rica. La lisozima extraída de la clara de huevo es una cadena peptídica única compuesta por 18 tipos de 129 residuos de aminoácidos. Es rico en aminoácidos básicos y tiene cuatro pares de enlaces disulfuro para mantener la configuración de la enzima. Es una proteína básica con lisina en el extremo N y leucina en el extremo C. Puede descomponer bacterias Gram positivas, como Micrococcus cellulolyticus, Bacillus megaterium y Aspergillus flavus.
La lisozima está cargada positivamente en un amplio rango de pH por debajo del punto isoeléctrico y puede adsorberse en resinas de intercambio catiónico débilmente ácidas. Después de la elución y la sal, la lisozima se puede precipitar y luego refinar para obtener el producto terminado. Adsorción de clara de huevo ↓ Lavado de resina 724 ↓ Elución de tampón ↓ Solución de sulfato de amonio Salado y diálisis para eliminar la proteína básica ↓ NaOH liofilización lisozima Polvo liofilizado precipitación secado lisozima A 5 ~ 10 ℃, agregue 540 kg de clara de huevo fresca al tratado En 80 kg de resina 724, revuelva y adsorba durante 6 horas, luego déjelo reposar a 0 ~ 5 ℃ durante la noche. Vierta la capa superior de clara de huevo, centrifugue la resina hasta que esté seca y lave repetidamente la proteína de huevo adherida con agua destilada. Luego cargue la resina en la columna y lávela con aproximadamente 150 litros de tampón de fosfato a 0-15 mol/. L, pH = 6 \sim 5. A continuación se eluye la resina con aproximadamente 600 l de solución de sulfato de amonio al 10% y se recoge el eluyente. Se añadió sulfato de amonio al eluyente de modo que el contenido final de sulfato de amonio fue del 40% y se produjo un precipitado blanco. Se dejó en un lugar frío durante la noche. Sifón el sobrenadante, aspira el precipitado y luego usa 1x agua destilada para disolver el precipitado en una pasta fina, luego colócalo en una bolsa de diálisis y dializa con agua destilada a aproximadamente 5°C durante aproximadamente 24 horas, cambiando el agua 2 a 3 veces en el medio. Centrifugar para eliminar el precipitado, lavar el precipitado nuevamente con una pequeña cantidad de agua y combinar el líquido de lavado y el líquido centrífugo. Luego agregue lentamente una solución de hidróxido de sodio de 1 mol/L al dializado mientras agita continuamente para elevar el valor del pH a 8?0~9?0. Si hay un precipitado blanco, retírelo mediante centrifugación. Luego use 3mol/L de ácido clorhídrico para ajustar el pH = 5 a 5?0, liofilizar y obtener lisozima en escamas blancas. También puede usar ácido clorhídrico de 3 mol/L para ajustar el pH de la solución de centrífuga a 3-5. Agregue lentamente cloruro de sodio sólido al 5 % mientras agita, déjelo reposar durante 48 horas a aproximadamente 5 °C, centrifugue y lave. precipitar con acetona a 0°C, secar para obtener lisozima.
Ventajas de editar este párrafo
1. La lisozima es una proteína muy estable con una fuerte resistencia al calor. La lisozima de clara de huevo es del tipo C y es la enzima más estable al calor que se conoce.
2. La lisozima no se inactiva mediante el tratamiento con disolventes orgánicos. Transferirla a una solución acuosa puede restaurar completamente la actividad de la lisozima.
3. La actividad es estable;
4. La lisozima es adecuada para pH 5,3 ~ 6,4 y puede usarse para conservar alimentos poco ácidos;
5.
6. La lisozima tiene un amplio espectro antibacteriano, no solo limitado a las bacterias G+, sino que también inhibe algunas bacterias G & tímidas;
7. La lisozima es una proteína natural. En 1992, la Asociación de Aditivos Alimentarios de la FAO/OMC reconoció que el uso de lisozima en los alimentos era seguro.
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Aplicación Médica
Se puede utilizar como sustancia antiinfecciosa natural con efecto bactericida. Tiene efectos antibacterianos, antivirales, hemostáticos, detumescentes y analgésicos, y acelera la recuperación de los tejidos. Se utiliza clínicamente para la rinitis crónica, faringitis aguda y crónica, úlceras orales, varicela, herpes zóster y verrugas planas. También se puede utilizar en combinación con medicamentos antibacterianos para tratar diversas infecciones bacterianas y virales. Es eficaz tanto por vía oral como intramuscular. Tomar por vía oral, de 3 a 5 comprimidos/vez (los comprimidos con cubierta entérica contienen 10 mg), 3 veces/día. Tomar por vía oral, 1 tableta/vez (la tableta bucal contiene 20 mg), de 4 a 6 veces/día. Uso externo: 1% ~ 2% de solución goteando, frotando o espolvoreando directamente. Inyección intramuscular, 50 mg ~ 100 mg/vez, 1 ~ 2 veces/día. Gotas para los ojos: utilizar solución al 2%.
Efectos secundarios
Ocasionalmente pueden producirse reacciones alérgicas leves. El cloruro de lisozima tiene una gama más amplia de efectos médicos, como reducir la flema, detener el sangrado, reparar tejidos, antiinflamatorio y analgésico, antiviral, etc. Por tanto, los medicamentos elaborados a partir de cloruro de lisozima se pueden utilizar para reducir la inflamación y eliminar las hemorroides, tratar resfriados, enfermedades de la piel, ojos, nariz y garganta.
Aplicación en alimentos
Se puede utilizar como conservante. Su función principal es hidrolizar la pared celular bacteriana dentro de la célula, destruyendo las bacterias patógenas fagocitadas. Esta enzima descompone las bacterias Gram positivas Bacillus subtilis y Micrococcus radiodurans. También tiene cierto efecto disolvente sobre bacterias Gram-negativas como Escherichia coli, Proteus vulgaris y Vibrio parahaemolyticus. Su concentración más eficaz es el 0,05%. Su efecto antiséptico se potencia cuando se combina con ácido fítico, polifosfato y glicina.
Campos de aplicación
1. La lisozima es una proteína sin efectos secundarios tóxicos, tiene cierto efecto bacteriolítico y puede utilizarse como conservante natural de alimentos.
Ahora se usa ampliamente en la conservación de productos acuáticos, productos cárnicos, pasteles, sake, vino para cocinar y bebidas. También se puede agregar a la leche en polvo para emulsionar a las vacas, inhibiendo así la supervivencia de microorganismos dañinos en los intestinos y directa o indirectamente; promoviendo el crecimiento de bifidobacterias en los intestinos.
2. Como factor inmunológico no específico que existe en los fluidos y tejidos corporales normales, la lisozima tiene una variedad de efectos farmacológicos, incluidos efectos antibacterianos, antivirales y antitumorales. Las indicaciones actuales de la lisozima médica incluyen hemorragia, hematuria, esputo con sangre y rinitis.
3. La lisozima tiene el efecto de destruir la estructura de la pared celular bacteriana. Las bacterias G+ pueden tratarse con esta enzima para obtener protoplastos. Por tanto, la lisozima es una enzima herramienta esencial para las operaciones de fusión celular en ingeniería genética e ingeniería celular.
Editar este párrafo mecanismo
La lisozima puede hidrolizar eficazmente el peptidoglicano en la pared celular bacteriana. Su sitio de hidrólisis son los átomos de carbono 65438 y el ácido N-acetilmurámico (NAM). entre los átomos de carbono 4 de la N-acetilglucosamina (NAG). El peptidoglicano es el componente principal de la pared celular bacteriana y consta de NAM, NAG y una "cola" peptídica (generalmente 4 aminoácidos). NAM y NAG están conectados a través de enlaces glicosídicos β-1.4, mientras que la "cola" peptídica está conectada al tercer átomo de carbono de NAM a través del grupo D-lactilcarboxilo, y hay un "puente" peptídico (un enlace peptídico o unos pocos amino ácidos) entre las colas peptídicas. Para bacterias Gram positivas (G+), como Micrococcus luteus, Bacillus subtilis o Micrococcus lisozima, bacterias Gram negativas (G-), como Escherichia coli, Proteus, Shigella, disentería, neumonía, etc. El contenido de peptidoglicano en sus paredes celulares es diferente. La pared celular de las bacterias G+ está compuesta casi en su totalidad por peptidoglicano, mientras que sólo la pared interna de las bacterias G- es peptidoglicano. Por tanto, la lisozima es muy eficaz para destruir las bacterias G+.
Edite este párrafo para utilizarlo
La lisozima de clara de huevo, una lisozima típica, es una proteína estable. El pH óptimo es 4-6,5, la temperatura óptima es 35 °C y la cantidad óptima de enzima debe determinarse de acuerdo con las condiciones de producción específicas.
Editar esta sección de almacenamiento
Se recomienda almacenar en un ambiente fresco y seco con una temperatura de almacenamiento bajo cero.
Si el tiempo de almacenamiento es demasiado largo o las condiciones de almacenamiento son desfavorables, la actividad de la enzima se reducirá en diversos grados; si la temperatura y la humedad son demasiado altas, es necesario aumentar la dosis adecuadamente; usándolo.
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Contenido de orina
Principio de la lisozima urinaria
La lisozima se deriva de monocitos y neutrófilos y puede disolver ciertas enzimas. El polisacárido de acetaminofén en la pared celular de los cocos grampositivos puede fermentar y romper la pared celular. Su peso molecular es de 1,4 millones a 15.000, puede filtrarse desde la membrana basal glomerular y más del 90% puede ser reabsorbido por los túbulos renales, por lo que hay poca o ninguna lisozima en la orina. Utilice la suspensión bacteriana como sustrato, agregue la muestra a analizar y manténgala caliente durante un cierto período de tiempo. Si la muestra contiene lisozima, las bacterias se lisarán y la turbidez de la suspensión bacteriana se reducirá o se aclarará. Los cambios de turbidez se pueden medir mediante fototurbidimetría o el tamaño del anillo de lisozima se puede medir mediante el método de la placa.
Valor de referencia de lisozima en orina
La concentración en orina es de 0 ~ 2 mg/L.
Importancia clínica
① Enfermedades tubulares renales: como inflamación e intoxicación, debido a daño tubular renal, reducción de la reabsorción y aumento de lisozima urinaria.
② Juicio pronóstico; : La lisozima urinaria estará elevada en la necrosis tubular aguda. Si aumenta gradualmente sin seguir disminuyendo, la función tubular renal no se recuperará bien. En la nefritis crónica y la insuficiencia renal crónica, la lisozima urinaria también aumenta;
③En la leucemia monocítica aguda, el contenido de lisozima sérica aumenta, excediendo la capacidad de reabsorción de los túbulos renales, y la lisozima urinaria puede aumentar. [3]