Pruebas bacteriostáticas y fungistáticas de métodos de prueba de esterilidad
Antes de utilizar el método de inoculación directa para la inspección de esterilidad, se puede utilizar el siguiente método para determinar si el producto de prueba tiene efectos antibacterianos y antifúngicos.
Utilice 4 tubos de medio de cultivo de bacterias aeróbicas, medio de cultivo de bacterias anaeróbicas y 2 tubos de medio de cultivo de hongos, e inocule dos tubos cada uno con de 10 a 100 cepas de Staphylococcus aureus, Clostridium sporogenes y Candida albicans, agregue la cantidad especificada de muestra de prueba. a un tubo, coloque todos los tubos de medio a la temperatura especificada y cultive durante 3 a 5 días. Si los microorganismos en cada tubo de medio de cultivo crecen bien en 24 horas, el producto de prueba no tiene efecto antibacteriano.
Si los microorganismos crecen débilmente, lentamente o no
en comparación con el tubo de cultivo sin el producto de prueba, se considerará que el tubo de cultivo está sujeto a la prueba. efecto antibacteriano. El producto de prueba debe tratarse mediante el método de dilución (plantado en una mayor cantidad de medio de cultivo) o el método de neutralización o filtración por membrana. Solo después de que se elimine la propiedad antibacteriana del producto de prueba se puede inocular en el medio de cultivo.
Métodos de inspección
Los métodos de inspección de esterilidad incluyen: método de inoculación directa y método de filtración por membrana. El primero es adecuado para artículos de prueba con efecto no antibacteriano y el segundo es adecuado para artículos de prueba con efecto antibacteriano o de gran capacidad.
Durante la operación, utilice un desinfectante adecuado para sumergir o limpiar la superficie del recipiente de la muestra de prueba o del embalaje exterior para desinfectar y luego retire el contenido de forma estéril.
En todas las pruebas de esterilidad se deben utilizar los disolventes y diluyentes correspondientes de la misma manera que los controles negativos.
1. Método de inoculación directa
(1) Preparación del artículo de prueba El artículo de prueba debe ser una inyección, un colirio para cirugía y lesiones penetrantes de la córnea, o una solución estéril
líquido, medir la muestra de prueba de acuerdo con la Tabla 1 o la Tabla 2 y mezclar.
Si el producto de prueba es un polvo estéril para inyección o un producto liofilizado estéril o una materia prima en polvo estéril para envasado directo para inyección,
De acuerdo con la Tabla 1 o la Tabla 2 Se estipula medir el producto de prueba y agregar agua esterilizada o una solución de cloruro de sodio estéril al 0,9%, o la cantidad de solvente especificada en el medicamento para preparar una solución de prueba de una determinada concentración.
Si el producto de prueba es un apósito quirúrgico, tome 4 paquetes del producto de prueba, desembálelos asépticamente y córtelos en diferentes partes
Tome aproximadamente 100 mg o 1 cm × 3 cm. 11 piezas de la muestra de prueba; tomar 5 paquetes mínimo de catgut y sutura, abrir el paquete, tomar 11 piezas e inocularlas en una cantidad adecuada de medio de cultivo suficiente para sumergir el artículo de prueba.
Si la muestra de prueba es un instrumento médico esterilizado, se deben tomar 11 muestras según el tamaño y la forma de la muestra e inocularlas en una cantidad apropiada de medio suficiente para
sumergir el muestra de prueba. O utilice 40 ml de solución estéril de cloruro de sodio al 0,9 % cada uno para enjuagar la pared interna (transfusión de sangre, bolsa de infusión) respectivamente. Recoja cada líquido de lavado, mézclelo y verifique según el método de filtración por membrana.
Si la muestra de prueba es un fármaco de penicilina, mida la muestra de prueba de acuerdo con la Tabla 1 o la Tabla 3 y agregue una cantidad adecuada de solución estéril de enzima penicilina suficiente para inactivar la penicilina.
agitar y mezclar. También se puede comprobar mediante el método de filtración por membrana.
Si el producto de prueba es un fármaco radiactivo, tomar 1 frasco (tubo) del producto de prueba e inocularlo en un medio de cultivo con un volumen de 7,5 ml. El volumen de inóculo de cada tubo es de 0,2 ml.
2. Operación: Tome la muestra de prueba preparada anteriormente e inocúlela en 6 tubos de bacterias aeróbicas y bacterias anaeróbicas mediante operación aséptica.
Se inoculó un tubo con 1 ml de estafilococo. aureus solución bacteriana de control como control positivo, y los otros 5 tubos se inocularon con medio de cultivo de hongos. Agite suavemente para mezclar la muestra de prueba con el medio de cultivo. Los tubos de medio de cultivo para bacterias aeróbicas y bacterias anaeróbicas deben colocarse a 30-35°C, y los tubos de medio de cultivo para eubacterias deben colocarse a 20-25°C durante 7 días. Durante el período de cultivo, se debe observar y registrar diariamente el crecimiento bacteriano. El tubo de control positivo debe tener crecimiento bacteriano dentro de las 24 horas. Si el medio de cultivo se vuelve turbio después de agregar el producto de prueba, no se puede juzgar por la apariencia después de 7 días de cultivo.
Para el crecimiento de microorganismos, Se puede transferir una cantidad adecuada de solución de cultivo al mismo medio fresco o al mismo medio inclinado.
Continúe el cultivo. Las bacterias se cultivan durante 2 días y los hongos se cultivan durante 3 días. Observe si aparece turbidez o superficie inclinada. nuevamente para un crecimiento estéril, o use un asa de inoculación para tomar una muestra del líquido de cultivo, teñirlo y usar un microscopio para observar si hay bacterias.
2. Método de filtración por membrana
Si el producto de prueba tiene efecto antibacteriano, mida el producto de prueba de acuerdo con la Tabla 1 o la Tabla 3 y procese según el método especificado en el medicamento
, agregue al menos 100 ml de solución estéril de cloruro de sodio al 0,9 % u otro disolvente adecuado, después de mezclar, pase a través de un filtro de membrana equipado con un tamaño de poro no superior a 0,45 μm y luego use cloro estéril al 0,9 %. Enjuague la membrana del filtro con solución de sodio u otra solución adecuada hasta que las bacterias de control positivo crezcan normalmente. Agregue bacterias aeróbicas, medio de cultivo de bacterias anaeróbicas y medio de cultivo de control positivo para medio de cultivo de hongos al filtro de membrana (filtro cerrado) respectivamente, o saque la membrana del filtro y divídala en 3 partes iguales. Los dos medios de cultivo anteriores, respectivamente, y el cultivo según la temperatura y el tiempo especificados. Al tubo de control positivo se le debe agregar 1ml de la solución bacteriana de control correspondiente según las características del producto de prueba (
Fármacos antibacterianos, se utiliza Staphylococcus aureus como bacteria de control; fármacos antianaeróbicos, Clostridium sporogenes se utiliza como bacteria de control; se utilizan medicamentos antimicóticos como bacteria de control;
fármacos bacterianos, utilizando Candida albicans como bacteria de control). Las bacterias en el tubo de control positivo se deben cultivar durante 24 a 48 horas y los hongos se deben cultivar durante 24 a 72 horas.
Juicio de resultados
Cuando el tubo de control positivo está turbio y efectivamente hay crecimiento bacteriano, y el tubo de control negativo es negativo, el juicio se puede realizar en función de los resultados observados
: Si los tubos de cultivo para bacterias aeróbicas, bacterias anaeróbicas y hongos son todos transparentes o turbios pero se demuestra que no tienen crecimiento bacteriano,
el producto de prueba debe considerarse calificado si es aeróbico; Se requieren tubos de cultivo de bacterias, bacterias anaeróbicas y hongos. Si alguno de los tubos de medios de cultivo de bacterias anaeróbicas y hongos está turbio y se confirma que tiene crecimiento bacteriano, se debe tomar nuevamente 2 veces la cantidad de la muestra de prueba y volver a analizarla de acuerdo con la ley. Excepto el tubo de control positivo, todos los demás No debe haber crecimiento bacteriano en ningún tubo; de lo contrario, el producto de prueba debe considerarse no calificado.