Durante el proceso de preparación del reactivo de biuret, ¿por qué se debe preparar el NaOH por separado y agregarlo al final?
La solución de NaOH se añade por separado primero para crear un entorno alcalino. En el entorno alcalino, el Cu2+ del reactivo B de biuret forma complejos con el enlace peptídico de la proteína para producir una reacción de color.
Si primero se mezclan el reactivo de biuret A y el reactivo de biuret B, es decir, se mezclan una solución de NaOH y CuSO4, entonces se producirá la precipitación de Cu(OH)2 y el reactivo perderá su efecto y no podrá ser En consecuencia, es imposible determinar si hay proteínas presentes.
El componente del reactivo B de biuret es una solución acuosa con una fracción másica de sulfato de cobre de 0,01 g/mL. Primero agregue el reactivo de biuret A al líquido de la muestra de tejido y agite uniformemente (se debe crear un ambiente alcalino), luego agregue el reactivo de biuret B y agite uniformemente.
Si el tejido contiene proteínas, verás que la solución se vuelve violeta. Los compuestos con dos o más enlaces peptídicos pueden reaccionar de color púrpura con el reactivo de biuret. El enlace peptídico de la proteína puede formar complejos con Cu2+ en solución alcalina para formar un compuesto de color rojo púrpura. La profundidad del color es directamente proporcional a la concentración de proteínas.
Información ampliada:
El bisuret (NH2CONHCONH2) es un producto que se obtiene calentando dos moléculas de urea a unos 180°C para liberar una molécula de amoniaco. En una solución alcalina fuerte, el biuret forma un complejo púrpura con iones de cobre divalentes, lo que se denomina reacción de biuret. Cualquier compuesto con dos grupos amida o dos enlaces peptídicos conectados directamente, o un enlace peptídico que pueda conectarse con un átomo de carbono intermedio, tiene una reacción de biuret.
El color del complejo morado es proporcional a la concentración de proteínas y no tiene nada que ver con el peso molecular de las proteínas ni con la composición de aminoácidos, por lo que puede utilizarse para determinar el contenido de proteínas. Las principales sustancias que interfieren con esta determinación incluyen: sulfato de amonio, tampón Tris y ciertos aminoácidos.
Las ventajas de este método son que es más rápido, diferentes proteínas producen tonos de color similares y hay pocas sustancias que interfieran. La principal desventaja es su escasa sensibilidad y no es adecuado para la determinación de trazas de proteínas.
Enciclopedia Baidu-Método Biuret