Cómo hacer modelos de células animales
Cómo hacer modelos de células animales, las instrucciones específicas son las siguientes:
Materiales de preparación
Equipo experimental, platos de cultivo celular, raspadores de células, pipetas, goteros Tubos, microscopios, mesas limpias, etc. Reactivos, medio DMEM, suero fetal de ternera, penicilina-estreptomicina, solución salina tamponada con fosfato (PBS), tripsina 0,25, etc. Fuente celular, línea celular animal o muestra de tejido.
2. Preparar medio de cultivo celular
Preparar medio DMEM y añadir cantidades adecuadas de suero fetal bovino y penicilina-estreptomicina. Lave el plato de cultivo celular con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y agregue una cantidad adecuada de medio de cultivo celular.
3. Recuento de células
Primero, utilice una pipeta para tomar una cantidad adecuada de líquido de cultivo celular y colóquela en la placa de recuento de células. Observe y cuente el número de células y luego calcule el número de células por mililitro.
4. Inocular las células
Coloque la placa de cultivo celular en una mesa de trabajo limpia, limpie la pared exterior de la placa con alcohol al 75% para mantener el interior de la placa esterilizado. Utilice una pipeta para tomar una cantidad adecuada de líquido de cultivo celular y colóquelo en el plato de cultivo celular. Utilice un raspador de células para raspar suavemente las células de modo que se distribuyan uniformemente en el medio de cultivo. Coloque la placa de Petri en una incubadora de dióxido de carbono, manteniendo la temperatura a 37°C y la humedad a 95°C.
5. Observar el crecimiento celular
Los experimentadores deben observar el crecimiento celular todos los días y registrar el número de células y los cambios morfológicos. Ajuste los parámetros de la incubadora de dióxido de carbono para mantener el valor de pH y la concentración de gas adecuados.
6. Recoger muestras de células
Cuando las células crezcan hasta una cierta densidad, utilice 0,25 de tripsina para digerir las células. Utilice una pipeta para recoger las células digeridas en un tubo de centrífuga. El sobrenadante se eliminó mediante centrifugación y el sedimento celular se lavó con solución salina tamponada con fosfato (PBS). Resuspender las células para realizar más experimentos o guardarlas.
7. Preservar las líneas celulares
El experimentador debe transferir la suspensión celular recogida a una placa de cultivo celular. Agregue una cantidad adecuada de suero bovino fetal para que la concentración sérica sea 10. Coloque la placa de Petri en un refrigerador de baja temperatura para almacenamiento a largo plazo.
8. Verificar líneas celulares
Reanimar y pasar las líneas celulares conservadas. Observe la morfología y el crecimiento celular a través de un microscopio. Realizar los ensayos biológicos y experimentos funcionales necesarios para verificar las propiedades y características de las células.