La expresión procariótica no se puede inducir a 37°C. ¿Cómo determinar la decodificación de proteínas después de la secuenciación de la expresión procariótica?

En los sistemas de expresión de proteínas procariotas, como el sistema de expresión de Escherichia coli, normalmente es necesario inducir genes extraños mediante inductores para poder expresarse. Este artículo presenta en detalle el principio de inducción de IPTG, el principio de inducción de proteínas extrañas y los procedimientos experimentales.

La gran mayoría de los genes en los procariotas están organizados en grupos según una correlación funcional y están densamente agrupados en los cromosomas. * * *Juntos forman una unidad de transcripción: un operón, también llamado unidad cooperativa de expresión genética. El operón lactosa de E. coli contiene tres genes estructurales Z, Y y A, que codifican la β-galactosidasa, la permeasa y la acetiltransferasa, respectivamente. Además, existen genes reguladores: la secuencia operadora O (operadora) y la secuencia promotora P (promotora e I (que codifica el represor Lac) no pertenecen al operón lactosa;

Gen estructural del operón lactosa

Principio de inducción del IPTG El represor Lac es una proteína estructural cuaternaria con cuatro subunidades idénticas, todas las cuales tienen sitios de unión para el inductor. En ausencia de lactosa, el operador lac (elemento) está en un estado reprimido. El represor Lac (es decir, la proteína represora en la figura siguiente) puede unirse al operador O, evitando que la ARN polimerasa se una a la secuencia P y bloquee. la vía de transcripción, por lo que inhibe el inicio de la transcripción. Pero cuando hay un inductor (aquí IPTG), el inductor puede unirse a la proteína represora, lo que provoca que cambie la conformación de la proteína represora, lo que hace que el represor se disocia del operador O, la ARN polimerasa ya no está bloqueada y el promotor P inicia la transcripción, inicia la reacción para iniciar la transcripción. En este sistema de operones, el verdadero inductor no es la lactosa en sí. La lactosa ingresa a las células y se convierte en el inductor fisiológico galactosa mediante la catálisis de la β-galactosidasa. En los experimentos, el isopropiltiogalactopiranósido (IPTG) se utiliza a menudo como inductor. IPTG es un inductor muy potente que no es metabolizado por bacterias y es muy estable, por lo que se utiliza mucho en laboratorios. Este inductor altamente eficiente es muy estable y no será metabolizado por bacterias, por lo que se usa ampliamente en laboratorios.