Sección 1 Mycobacterium tuberculosis
1. Características biológicas Mycobacterium tuberculosis es una bacteria delgada y ligeramente curvada con un tamaño de 1 ~ 4x0,4μ m (Figura 14-1A). Mycobacterium bovis es más grueso y más corto. La pared celular de las micobacterias tiene un alto contenido de lípidos, que representan aproximadamente el 60% del peso seco. En particular, hay una gran cantidad de ácido micólico alrededor de la capa de peptidoglicano, que puede afectar la penetración de los colorantes. Las micobacterias pueden infectarse mediante la tinción ácido-alcohol resistente de Zecher-Nielsen, que se puede teñir con 5-carbol fucsina después de calentar, pero no es fácil decolorar con etanol de ácido 3-clorhídrico. Si se tiñe dos veces con azul de metileno, las micobacterias son rojas y otras bacterias y el material de fondo son azules.
En los últimos años se ha descubierto que Mycobacterium tuberculosis aún presenta una membrana fuera de la pared celular. Generalmente no es fácil de ver porque hay daños durante el proceso de producción. La deshidratación y el encogimiento de la cápsula se pueden prevenir si las muestras preparadas para microscopía electrónica se tratan con gelatina antes de la fijación. Se puede ver bajo un microscopio electrónico que hay un área gruesa y transparente en el exterior de la bacteria, es decir, la membrana, que tiene un cierto efecto protector sobre Mycobacterium tuberculosis. Ejercicio aeróbico. La temperatura óptima es 37 ℃ y no crecerá por debajo de 30 ℃. La pared celular de Mycobacterium tuberculosis tiene un alto contenido de lípidos, lo que afecta la absorción de nutrientes, por lo que crece lentamente. En medio de cultivo general, cada generación requiere de 18 a 24 horas, y sólo 5 horas cuando los nutrientes son ricos.
El aislamiento primario requiere un medio rico en nutrientes. El medio sólido Lowenstein-Jensen se utiliza habitualmente y contiene yema de huevo, glicerol, patata, sales inorgánicas y verde de malaquita. El verde de malaquita puede inhibir el crecimiento de diversas bacterias y facilitar el aislamiento y el cultivo a largo plazo. Las yemas de huevo contienen factores de crecimiento lipídicos que estimulan el crecimiento. Dependiendo de la cantidad de bacterias inoculadas, el crecimiento de la colonia se puede observar en 2 a 4 semanas. Las colonias son granulares, nodulares o con forma de coliflor, de color blanco lechoso o beige y opacas. En medios líquidos, las bacterias pueden crecer rápidamente debido a la gran superficie en contacto con los nutrientes. Por lo general, tarda de 1 a 2 semanas en crecer. La tasa positiva del cultivo líquido en el examen de muestras clínicas es varias veces mayor que la del cultivo sólido. Mycobacterium tuberculosis es sensible al etanol porque su pared celular contiene lípidos y morirá en 2 minutos en etanol al 70%. Además, los lípidos pueden prevenir la pérdida de agua en el cuerpo bacteriano, por lo que es particularmente resistente a la desecación. El polvo adherido sigue siendo infeccioso durante 8 a 10 días y puede sobrevivir en el esputo seco durante 6 a 8 meses. Mycobacterium tuberculosis es sensible al calor húmedo y puede matarse calentándolo en líquido a una temperatura de 62 a 63°C durante 65,438±05 minutos o hirviéndolo. Mycobacterium tuberculosis es sensible a la luz ultravioleta. Puede morir con la luz solar directa durante varias horas y puede usarse para desinfectar ropa y libros de pacientes con tuberculosis.
La resistencia a los medicamentos de Mycobacterium tuberculosis está estrechamente relacionada con la presencia de materia orgánica en el medio ambiente. Por ejemplo, el esputo puede potenciar la resistencia a los medicamentos de Mycobacterium tuberculosis. Debido a que la mayoría de los desinfectantes pueden coagular las proteínas del esputo y envolverlas alrededor de las bacterias, éstas no se eliminan fácilmente. 5. El ácido carbólico puede matar Mycobacterium tuberculosis en 30 minutos cuando no hay flema y 24 horas cuando hay flema. 5. Lysol puede matar Mycobacterium tuberculosis durante 5 minutos en 5 minutos cuando no hay flema y de 1 a 2 horas cuando; hay flema.
Mycobacterium tuberculosis es resistente a ácidos (3 HCl o 6 H2SO4) o bases (4 NaOH) y permanece insensible durante 15 minutos. Puede usarse para tratar muestras contaminadas por bacterias y sustancias viscosas en muestras digeridas durante el aislamiento y el cultivo. Mycobacterium tuberculosis es resistente al verde de malaquita (1: 13000) y agregarlo al medio de cultivo puede inhibir el crecimiento de diversas bacterias.
Mycobacterium tuberculosis es sensible a la estreptomicina, isoniazida, rifampicina, cicloserina, etambutol, kanamicina y ácido paraaminosalicílico. , pero es fácil desarrollar resistencia a los medicamentos después de una medicación a largo plazo, y la pirazinamida es resistente
Mycobacterium tuberculosis es fácil de desarrollar resistencia a los medicamentos. En medios sólidos, ¿el compuesto común 1 que contiene isoniazida? g, estreptomicina 10? g, rifampicina 50? Mycobacterium tuberculosis que puede crecer es resistente a los medicamentos. Se reduce la virulencia de las cepas resistentes a los medicamentos. La isoniazida puede afectar la síntesis de ácido micólico en la pared celular e inducir que Mycobacterium tuberculosis se convierta en tipo L, lo que puede ser una de las razones de la resistencia a la isoniazida. Las pruebas de sensibilidad al fármaco mostraron que el fármaco era resistente a la isoniazida, pero la mayoría seguía siendo sensible a la rifampicina y la estreptomicina. Por lo tanto, actualmente se recomienda el uso de isoniazida en combinación con rifampicina o pirazinamida para reducir la aparición de resistencia a los medicamentos y mejorar la eficacia. Clínicamente, también se ha reducido la patogenicidad de las cepas resistentes a la isoniazida. Los experimentos han demostrado que los conejillos de indias infectados con Mycobacterium tuberculosis a menudo mueren en 6 semanas y presentan lesiones miliares en el hígado. Sin embargo, a menudo se necesitan más de cien días para morir después de una infección de tipo L y las lesiones carecen de los nódulos típicos de la tuberculosis. Sin embargo, el tipo L tiene propiedades de recuperación y puede provocar una recaída si no se trata a fondo.
En los últimos años, las cepas de Mycobacterium tuberculosis multirresistentes han aumentado gradualmente en todo el mundo, provocando incluso epidemias. La resistencia a los medicamentos en Mycobacterium tuberculosis puede resultar de mutaciones espontáneas (resistencia primaria) o de la selección de mutaciones para el uso inadecuado de medicamentos (resistencia secundaria). Sin embargo, el desarrollo de resistencia a múltiples fármacos puede deberse principalmente a este último. Los genes de resistencia a los medicamentos están en el cromosoma y los genes de resistencia de diferentes medicamentos no están conectados, por lo que el tratamiento farmacológico combinado es eficaz. La resistencia a la isoniazida se asocia con la deleción del gen katG. Las cepas susceptibles tienen este gen, pero las cepas resistentes no. La rifampicina actúa principalmente sobre la ARN polimerasa. Las mutaciones en el gen que codifica esta enzima (rpoB) provocan resistencia a la rifampicina. En 1999, se notificaron mutaciones en todos los genes rpoB en siete cepas resistentes a la rifampicina en China. Este no es el caso de las cepas sensibles.
En segundo lugar, patogenicidad
Mycobacterium tuberculosis no produce toxinas endógenas ni exógenas. Su patogenicidad puede estar relacionada con la inflamación causada por la proliferación bacteriana en tejidos y células, la toxicidad de los componentes y metabolitos bacterianos y el daño inmunológico del cuerpo a los componentes bacterianos. Relacionado con cápsulas, lípidos y proteínas.
1. Las cápsulas están compuestas principalmente por polisacáridos, algunos lípidos y proteínas. Sus efectos sobre Mycobacterium tuberculosis incluyen: ① La cápsula puede unirse al receptor 3 del complemento (CR3) en la superficie de los fagocitos, lo que ayuda a Mycobacterium tuberculosis a adherirse e invadir las células huésped (2) Hay una variedad de enzimas que pueden degradar sustancias macromoleculares; tejidos del huésped y proporciona nutrientes para la reproducción del Mycobacterium tuberculosis invasor ③La cápsula puede evitar que sustancias nocivas del huésped entren al Mycobacterium tuberculosis, e incluso la molécula pequeña de NaOH no es fácil de ingresar. Por lo tanto, las muestras de tuberculosis se digieren con 4 NaOH. Generalmente, las bacterias mueren rápidamente, pero Mycobacterium tuberculosis puede tolerarlas durante decenas de minutos. La cápsula también inhibe la fusión de fagocitos y lisosomas después de la invasión de Mycobacterium tuberculosis.
2. Lípidos Según estudios experimentales, la virulencia de las bacterias puede estar relacionada con sus complejos componentes lipídicos, especialmente los glicolípidos.
① Factor tipo cordón: Es un glicolípido que combina ácido micólico y trehalosa. Las bacterias pueden disponerse en forma de zigzag en medios de cultivo líquidos (Figura 14-2). Este factor está estrechamente relacionado con la virulencia de Mycobacterium tuberculosis. Puede dañar las membranas mitocondriales de las células, afectar la respiración celular, inhibir la migración de leucocitos y causar granulomas crónicos. Si se extraen de bacterias, estas pierden su toxicidad.
②Fosfolípidos: pueden promover la proliferación de monocitos y convertir los macrófagos de las lesiones inflamatorias en células epiteliales, formando así nódulos tuberculosos.
③Sulfatida: puede inhibir la combinación de fagocitos y lisosomas en los fagocitos, permitiendo que Mycobacterium tuberculosis sobreviva en los fagocitos durante mucho tiempo.
(4) Cera D: un compuesto de glicolípidos peptídicos y ácido micólico, que se puede extraer de cepas de virus o vacunas BCG con metanol. Tiene un efecto adyuvante y puede estimular al organismo a producir cera de tipo retardado. reacción de hipersensibilidad.
3. La proteína es antigénica y puede provocar reacciones de hipersensibilidad cuando se combina con la cera D, provocando necrosis tisular y síntomas de intoxicación sistémica, y desempeña un cierto papel en la formación de nódulos tuberculosos.
Mycobacterium tuberculosis puede invadir organismos susceptibles a través del tracto respiratorio, el tracto digestivo o lesiones cutáneas, causando tuberculosis en una variedad de tejidos y órganos, siendo el tracto respiratorio el que causa la mayor parte de la tuberculosis. Debido a la gran cantidad de flora normal presente en el intestino, M. tuberculosis debe competir para sobrevivir y adherirse a las células susceptibles. No existe una flora normal en los alvéolos y Mycobacterium tuberculosis puede inhalarse a través de gotitas o polvo bacteriano, por lo que la tuberculosis es más común. Debido a la diferente virulencia, cantidad y estado inmunológico de las bacterias infectantes, la tuberculosis puede tener las dos manifestaciones siguientes.
(1) Infección primaria: se presenta mayoritariamente en niños. Hay una gran cantidad de macrófagos en los alvéolos y una pequeña cantidad de Mycobacterium tuberculosis viable ingresa a los alvéolos y es engullida por los macrófagos. Debido a que las bacterias tienen una gran cantidad de lípidos, pueden resistir la lisozima, continuar multiplicándose, destruir los macrófagos y causar inflamación alveolar, lo que se denomina foco primario. Debido a la falta de inmunidad específica, Mycobacterium tuberculosis a menudo llega a los ganglios linfáticos hiliares a través de los vasos linfáticos, provocando un agrandamiento de los ganglios linfáticos hiliares, lo que se denomina síndrome primario. En este momento, una pequeña cantidad de Mycobacterium tuberculosis puede ingresar a la sangre y diseminarse por todo el cuerpo, pero es posible que no haya síntomas evidentes (lo que se denomina bacteriemia oculta; al mismo tiempo, los macrófagos de la lesión presentan antígenos específicos a los linfocitos periféricos); De 3 a 6 semanas después de la infección, el cuerpo produce inmunidad celular específica y reacciones de hipersensibilidad. Los fosfolípidos de la pared celular de Mycobacterium tuberculosis estimulan, por un lado, la transformación de los macrófagos en células de tipo epitelial, que se fusionan entre sí o forman células gigantes multinucleadas (células gigantes de Langerhans) mediante fisión nuclear; inhibe la disolución del tejido por proteasas , lo que lleva a la disolución incompleta del tejido lesionado, necrosis caseosa, rodeada de células epiteliales, linfocitos, macrófagos y fibroblastos, formando nódulos tuberculosos (es decir, granuloma tuberculoso). La tuberculosis activa puede desarrollarse aproximadamente 5 años después de la infección. Un pequeño número de personas con inmunidad baja puede propagarse a los huesos, las articulaciones, los riñones, las meninges y otras partes a través de la sangre y el sistema linfático, causando la tuberculosis correspondiente. Más del 90% de las infecciones primarias se vuelven fibróticas o calcificadas pero se resuelven sin tratamiento. Sin embargo, todavía hay una cierta cantidad de Mycobacterium tuberculosis acechando en las lesiones durante mucho tiempo, lo que no sólo estimula la inmunidad del cuerpo sino que también puede convertirse en una fuente de infección endógena en el futuro.
(2) Después de la infección primaria: Los pulmones son las lesiones más comunes. El patógeno puede ser extraño (infección exógena) u originalmente latente en la lesión (infección endógena). Debido a que el cuerpo tiene inmunidad celular específica, la característica después de la infección primaria es que las lesiones están más localizadas y generalmente no afectan a los ganglios linfáticos adyacentes. Los focos de necrosis caseosa rodeados de fibrina pueden calcificarse y sanar. Si un nódulo caseoso se rompe y drena hacia un bronquio adyacente, se puede formar una cavidad y se pueden liberar grandes cantidades de Mycobacterium tuberculosis en el esputo.
En 1990, se informaron varios tipos de tuberculosis pulmonar en el extranjero y se encontró que el 40% de las muestras de esputo tenían forma de L. En los últimos años, se ha observado que las lesiones contienen bacterias acidorresistentes atípicas sin los nódulos típicos de la tuberculosis, lo que se denomina "tuberculosis no reactiva". La misma situación se encontró en animales de experimentación infectados con Mycobacterium tuberculosis tipo L. Esto se debe a que el tipo L de Mycobacterium tuberculosis carece del componente lipídico de la pared celular y no puede estimular la formación de nódulos, sólo linfadenopatía y necrosis caseosa. A juzgar únicamente por las lesiones, a menudo se confunde con linfadenitis crónica. Se realizó un estudio retrospectivo sobre 155 muestras de bloques de cera diagnosticadas como linfadenitis crónica. Usando el anticuerpo BCG para la tinción con inmunoenzimas, 68,9 es positivo y 60 son gránulos acidorresistentes. Se demuestra que una gran proporción de casos están relacionados con Mycobacterium tuberculosis tipo L. Esto debe tenerse en cuenta clínicamente para evitar diagnósticos erróneos y erróneos. Mecanismo inmunológico: Mycobacterium tuberculosis es una infección intracelular y su inmunidad es principalmente inmunidad celular con células T. Las células T no pueden interactuar directamente con las bacterias intracelulares y primero deben reaccionar con las células infectadas, lo que hace que las células colapsen y liberen Mycobacterium tuberculosis. Aunque el cuerpo puede producir anticuerpos contra Mycobacterium tuberculosis, los anticuerpos sólo desempeñan un papel de apoyo cuando entran en contacto con las bacterias liberadas. Después de que Mycobacterium tuberculosis invade el tracto respiratorio, del 80 al 90% de los alvéolos son macrófagos y el 10% son linfocitos (principalmente células T). Los macrófagos inactivos en los alvéolos originales tienen una actividad antibacteriana débil y no pueden prevenir el crecimiento del Mycobacterium tuberculosis ingerido, pero pueden transportar Mycobacterium tuberculosis a otros lugares. Sin embargo, se puede presentar antígeno para sensibilizar a los linfocitos T circundantes.
Los linfocitos sensibilizados pueden producir una variedad de linfocinas, como IL-2, IL-6 e INF-? Junto con el TNF-α, matan a Mycobacterium tuberculosis en las lesiones. ¿INF en linfoquinas? Lo principal es que existen muchos tipos de células que pueden producir INF-? El orden de penetración es NK y ? /δT y células T CD4, CD8 α/β. Algunas de las células mencionadas anteriormente pueden matar directamente las células objetivo y algunas producen linfocinas para activar los macrófagos, lo que fortalecerá la fagocitosis, provocará ráfagas respiratorias y conducirá a la producción de mediadores reactivos de oxígeno y mediadores reactivos de nitrógeno para matar bacterias.
Las células T del cuerpo se pueden dividir en dos tipos según los diferentes receptores de antígenos (TCR): uno está compuesto por una cadena α y una cadena β, llamadas células T α/β (que contienen marcadores CD4 o CD8). , ¿Otra razón? Se llaman cadenas y cadenas triangulares. /células T delta (en su mayoría sin marcadores CD4 o CD8). ¿El primero en la sangre periférica de humanos y ratones? 90, este último
¿Prestas atención a los últimos años? Las células T /delta atacan principalmente a una proteína de choque térmico (HSP) en las micobacterias. HSP es una proteína altamente conservada que existe desde células procarióticas hasta animales y plantas, y su secuencia de aminoácidos es 50 homóloga. El contenido de HSP en los organismos normales es muy pequeño, pero se produce en grandes cantidades cuando cambian las condiciones ambientales externas, como infección, fiebre y transformación maligna de las células. Por lo tanto, la HSP también se denomina proteína de estrés. La HSP existe en muchas bacterias patógenas y su secuencia de aminoácidos tiene la misma composición. Las infecciones subclínicas causadas por diferentes bacterias pueden inducir la misma inmunidad hasta cierto punto y se consideran inmunidad no específica.
La inmunidad a la tuberculosis pertenece a la inmunidad contra las infecciones, también conocida como inmunidad bacteriana, es decir, la inmunidad sólo se producirá cuando Mycobacterium tuberculosis o sus componentes estén presentes en el organismo. Una vez que desaparecen todas las Mycobacterium tuberculosis o sus componentes en el cuerpo, la inmunidad ya no existe.
Reacciones inmunes y de hipersensibilidad: Bajo la protección de Mycobacterium tuberculosis también se pueden observar reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado, ambas mediadas por células T. Como lo demuestra el fenómeno de Koch, por primera vez se inyectó Mycobacterium tuberculosis por vía subcutánea en cobayas sanas. Después de 10 a 14 días, la ulceración local no sanaba, los ganglios linfáticos cercanos se inflamaban y las bacterias se diseminaban por todo el cuerpo, mostrando las características de una infección primaria. Si un conejillo de indias infectado con tuberculosis se reinfecta con Mycobacterium tuberculosis, las úlceras locales aparecerán rápidamente en 1 o 2 días y serán fáciles de curar. Los ganglios linfáticos cercanos no están inflamados y las bacterias rara vez se propagan. Las úlceras que se observan después de la infección primaria son superficiales, fáciles de curar y no se propagan cuando se reinfectan, lo que indica que el cuerpo tiene cierta inmunidad. Sin embargo, las úlceras aparecen rápidamente durante la reinfección, lo que indica que las reacciones de hipersensibilidad están involucradas en la producción de inmunidad. Estudios de los últimos años han demostrado que Mycobacterium tuberculosis induce reacciones inmunes y de hipersensibilidad a diferentes sustancias. Las reacciones de hipersensibilidad son causadas principalmente por la proteína tuberculina y la D*** cerosa, mientras que la inmunidad es causada por el ARN ribosomal (ARNr) de Mycobacterium tuberculosis. Dos componentes antigénicos diferentes activan diferentes subconjuntos de células T y liberan diferentes linfocinas.
Prueba de tuberculina: La prueba de tuberculina es una prueba que determina si el organismo puede provocar una reacción de hipersensibilidad al Mycobacterium tuberculosis al aplicar tuberculina en la piel.
1. Reactivo de tuberculina: Antiguamente se utilizaba la antigua tuberculina (OT). El método de preparación consiste en inocular Mycobacterium tuberculosis en un medio de cultivo de caldo de glicerina, cultivarlo durante 4 a 8 semanas, calentar, concentrar y filtrar. Diluido 2.000 veces, conteniendo 5 unidades por 0,1 ml. Actualmente se utilizan derivados proteicos purificados (PPD). Hay dos tipos de PPD: PPD-C elaborado a partir de Mycobacterium tuberculosis y BCG-PPD elaborado a partir del Bacillus Calmette-Guérin. 5 unidades por 0,1 ml.
2. Método de prueba y significado: En las pruebas convencionales, se inyectaron 5 unidades de cada uno de los dos PPD en la piel de los dos antebrazos respectivamente. Después de 48 a 72 horas, aquellos con hinchazón e induración superior a 5 mm se consideran positivos, y aquellos con induración ≥15 mm son fuertemente positivos, lo cual es significativo para el diagnóstico clínico. Si la hinchazón en el lado PPD-C es mayor que en el lado BCG-PPD, está infectado. Por el contrario, el lado BCG-PPD es más grande que el lado PPD-C, lo que puede deberse a la vacunación BCG.
Una reacción negativa indica que no hay infección por Mycobacterium tuberculosis, pero se deben considerar las siguientes situaciones:
① En la etapa inicial de la infección, tarda más de 4 semanas en desarrollarse una reacción de hipersensibilidad después de la infección con Mycobacterium tuberculosis;
②Las personas mayores;
③Pacientes con tuberculosis grave u otras enfermedades infecciosas, como la baja inmunidad celular causada por el sarampión;
(4) Adquiridos Aquellos con inmunidad celular baja, como aquellos con SIDA o tumores, han usado inmunosupresores. Para eliminar los falsos negativos, algunas unidades domésticas utilizan una inyección estéril de fitohemaglutinina (PHA), 0,1 ml que contiene 10 μg para pruebas cutáneas. Si el enrojecimiento y la hinchazón son mayores que el nivel de PHA en 24 horas, la inmunidad celular es normal. Si no hay respuesta o la respuesta no excede el nivel de PHA, la inmunidad celular es baja. Los signos y síntomas de la tuberculosis suelen ser atípicos. Aunque el diagnóstico puede confirmarse mediante rayos X, el diagnóstico aún depende del examen bacteriológico.
Seleccione las muestras según el sitio de infección. Se puede utilizar esputo, líquido de lavado bronquial, orina, heces, líquido cefalorraquídeo o derrame torácico y ascítico. Otras infecciones extrapulmonares pueden provenir de sangre, secreciones o células del tejido en el sitio correspondiente.
Las muestras de baciloscopía directa se untan directamente o después de la recolección bacteriana y se realiza una tinción acidorresistente. Si se encuentran bacterias acidorresistentes positivas, se puede hacer un diagnóstico preliminar. La tinción acidorresistente generalmente utiliza el método Zecher-Nielsen. Para mejorar el teñido, se puede utilizar el método IK (Kinyoun intensificado). Teñir nuevamente con rojo carbólico durante la noche y decolorar con ácido clorhídrico 0,5 y etanol durante 30 segundos, incluida la mayoría de los tipos L de Mycobacterium tuberculosis, que también se pueden colorear. Para mejorar la sensibilidad de la microscopía, también se puede utilizar la tinción con auramina. Mycobacterium tuberculosis muestra fluorescencia dorada bajo un microscopio de fluorescencia.
Recolectar bacterias primero y luego analizarlas puede aumentar la tasa de detección. Los cultivos y los experimentos con animales también deben pasar por el proceso de recolección de bacterias para eliminar bacterias extrañas. No hay bacterias perdidas en el líquido cefalorraquídeo, el derrame pleural ni la ascitis, y las bacterias se pueden recolectar directamente mediante centrifugación. Las muestras contaminadas como esputo, líquido de lavado bronquial, orina y heces deben tratarse con NaOH 4 (la relación esputo-álcali es de 1:4 y la relación líquido-álcali del lavado bronquial de orina es 1:1) durante 15 minutos. Si el tiempo es demasiado largo, tanto las micobacterias Mycobacterium tuberculosis tipo L como las no tuberculosas morirán fácilmente. Primero, agregue 0,5 ml de ácido 5-tánico y 0,5 ml de ácido 5-acético a la muestra de orina, colóquela en una probeta medidora cónica y tome el sedimento para procesar. El material tratado se centrifugó nuevamente. El precipitado se eliminó para tinción de frotis y examen microscópico. Si se requiere cultivo adicional o inoculación animal, se debe realizar una neutralización ácida antes de la centrifugación.
Cultivo de aislamiento Inocular la colección bacteriana neutralizada en medio de cultivo sólido, colocar el recipiente con un tapón de goma a 37°C para el cultivo y observar 65,438±0 veces por semana. Mycobacterium tuberculosis crece lentamente y generalmente tarda de 2 a 4 semanas en convertirse en una bacteria visible. Durante el cultivo líquido, el material de recolección bacteriana se puede dejar caer en el medio de cultivo que contiene suero y las partículas crecerán en el fondo del tubo en 1 a 2 semanas. Utilizando el sedimento como frotis, los resultados se pueden obtener rápidamente y se pueden realizar más pruebas bioquímicas y de sensibilidad a los medicamentos para distinguir los bacilos tuberculosos de los no tuberculosos. Los estudiosos nacionales han demostrado que Mycobacterium tuberculosis tipo L puede existir en las células sanguíneas o adherirse a la superficie celular. La velocidad de sedimentación globular tiende a acelerarse en estos pacientes. Inmediatamente después de la hemólisis, la inoculación de medio de cultivo hipertónico tipo L de Mycobacterium tuberculosis con solución salina hipotónica puede aumentar la tasa positiva de cultivo.
En experimentos con animales, el material recogido se inyectó por vía subcutánea en la ingle de cobayas. Después de 3 a 4 semanas, si los ganglios linfáticos locales están inflamados y la prueba de tuberculina resulta positiva, se puede realizar la disección. Observe los pulmones, el hígado, los ganglios linfáticos y otros órganos en busca de tuberculosis y realice exámenes morfológicos y de cultivo. Si la enfermedad no aparece después de 6 a 8 semanas, también se realizará un examen de anatomía.
Generalmente, el número de bacterias para un diagnóstico rápido es de 5x103 ~ 4/ml para el examen de frotis y 1x102/ml para el cultivo. Cuando el número de bacterias en la muestra es menor, es difícil obtener un resultado positivo y el cultivo lleva mucho tiempo. En la actualidad, la tecnología de amplificación por reacción en cadena de la polimerasa se ha aplicado a la identificación del ADN de Mycobacterium tuberculosis. Sólo se necesita una pequeña cantidad de bacterias por mililitro para obtener un resultado positivo, y 1? Los resultados se obtienen en dos dimensiones. Se debe prestar atención a la contaminación del equipo experimental para evitar falsos positivos. Además, debido a la pérdida de la pared celular y al engrosamiento compensatorio de la membrana celular, la lisozima comúnmente utilizada no puede romper la membrana celular para liberar ADN, lo que resulta en una PCR falsamente negativa.
Las células pueden ser positivas después de que se muelen completamente con un triturador de tejidos hasta que revientan. Actualmente, las unidades calificadas utilizan el método BACTEC, utilizando medio de cultivo 7H12 que contiene ácido palmítico 14C como sustrato de fuente de carbono y calculan si hay bacilos acidorresistentes en la muestra midiendo la cantidad de 14C producida durante el metabolismo bacteriano. 7 días. Se puede emitir un informe.
En los últimos años, estudios nacionales y extranjeros han demostrado que alrededor del 40% de los pacientes con diversos tipos de tuberculosis pulmonar clínica tienen el tipo L aislado. Después de tratar a los pacientes con tuberculosis, el tipo bacteriano desaparece, pero el tipo L a menudo persiste. El tipo I todavía se puede detectar en aproximadamente el 8% de los pacientes con caries que no excretan la forma bacteriana en el esputo. Por lo tanto, algunos estudiosos sugieren que también se deben utilizar pruebas múltiples de tipo L como uno de los criterios para juzgar la actividad de la tuberculosis. Sólo cuando tanto las bacterias como el tipo L se vuelven negativos se puede considerar que el esputo es negativo. Prevención En los últimos 20 años, los principales métodos para controlar la tuberculosis propuestos por organizaciones internacionales son los siguientes:
(1) Detectar y tratar pruebas de esputo positivas
② Vacunación de recién nacidos con; Vacuna BCG.
Unas 80 personas quedaron protegidas. En la década de 1940, la tasa de mortalidad por tuberculosis en algunas ciudades de mi país era de más de 200/654,38 millones. Después de la liberación, las condiciones sanitarias mejoraron y la tasa de mortalidad se redujo a 30/1973 ~ 1977. Sin embargo, a partir de 1979, la epidemia disminuyó muy lentamente durante tres inspecciones aleatorias a gran escala en todo el país. De 1979 a 1990, la tasa de disminución anual de la prevalencia fue de 2,8 y la tasa de disminución anual de la positividad de la prueba de esputo fue de 3,0. La tasa de mortalidad actual es de 19/654,38 millones, que sigue siendo el doble que la de otras enfermedades infecciosas combinadas. El Ministerio de Salud exige que la tasa de vacunación con BCG de los recién nacidos alcance el 90% en el año 2000. Según las estadísticas, la tasa de incidencia de las personas vacunadas cuando son recién nacidos es aproximadamente un 80% menor que la de las personas que no están vacunadas.
La BCG es una vacuna viva. El número de bacterias vivas en la vacuna afecta directamente al efecto inmunológico, por lo que actualmente hay vacunas liofilizadas. Una nueva vacuna de ARN ribosomal (ARNr) está atrayendo la atención, pero todavía se encuentra en fase experimental.
La rifampicina, la isoniazida, el etambutol y la estreptomicina son fármacos de primera línea. La combinación de rifampicina e isoniazida puede reducir la aparición de resistencia a los medicamentos. Para infecciones graves, la pirazinamida se puede combinar con rifampicina e isoniazida. 1 g de lesiones o caries de queso contiene aproximadamente de 106 a 10 Mycobacterium tuberculosis. Se puede producir una mutación resistente a los medicamentos por cada 105~6 cepas, y se necesitan 1011 cepas para dos tipos de resistencia. Es apropiado usar los dos medicamentos juntos.