Red de conocimientos sobre prescripción popular - Como perder peso - ¿Cuáles son los pasos para extraer ADN del hígado de un animal?

¿Cuáles son los pasos para extraer ADN del hígado de un animal?

Funcionamiento

1. Pesar 8g de hígado de cerdo, triturarlo con un homogeneizador (baño de hielo), añadir 0,1mol/l de tampón de citrato de sodio NaCl-0,05mol/l equivalente al doble del peso del hígado, triturar tres veces. , luego verter el homogeneizado y centrifugar a 4000 rpm durante 10 min. agregar 25 ml de solución tampón al precipitado y centrifugar a 4000 rpm durante 20 minutos;

2. Agregue 40 ml de tampón de citrato de sodio 0,1 mol/L-0,05 mol/L, 20 ml de solución mixta de alcohol 3-isoamílico HCl y 4 ml de SDS al 5 % al precipitado anterior para que finalmente la concentración sea 0,41. %, agitar durante 30 minutos, luego agregar lentamente NaCl sólido para alcanzar una concentración de 1 mol/L, centrifugar la solución mezclada anterior a 3500 r/min durante 20 minutos y recoger la fase acuosa clara.

3. Agregue un volumen igual de etanol al 95% a la solución acuosa, revuelva lentamente con una varilla de vidrio mientras agrega y use papel de filtro para absorber el exceso de etanol del gel envuelto alrededor de la varilla de vidrio para obtener crudo. ADN. Disolverlo en agua destilada, ajustar el volumen a 50 ml y determinar el contenido de ADN mediante el método de la difenilamina.

4. Purificación: Coloque el ADN crudo obtenido anteriormente en 20 ml de solución de citrato trisódico de 0,015 mol/l NaCl-0,0015 mol/l y agregue 1 vez el volumen de la solución mixta de cloroformo y alcohol isoamílico. 10 min, centrifugar (4000 r/min, 65438). Centrifugar, desechar el sobrenadante y precipitar (ADN crudo). Finalmente, lavar el precipitado resultante dos veces con etanol absoluto y secar al vacío.