¿Cuáles son los pasos para extraer ADN del hígado de un animal?

1. Pesar 8g de hígado de cerdo, triturarlo con un homogeneizador (baño de hielo), añadir 0,1mol/l de tampón de citrato de sodio NaCl-0,05mol/l equivalente al doble del peso del hígado, triturar tres veces. , luego verter el homogeneizado y centrifugar a 4000 rpm durante 10 min. agregar 25 ml de solución tampón al precipitado y centrifugar a 4000 rpm durante 20 minutos;

2. Agregue 40 ml de tampón de citrato de sodio 0,1 mol/L-0,05 mol/L, 20 ml de solución mixta de alcohol 3-isoamílico HCl y 4 ml de SDS al 5 % al precipitado anterior para que finalmente la concentración sea 0,41. %, agitar durante 30 minutos, luego agregar lentamente NaCl sólido para alcanzar una concentración de 1 mol/L, centrifugar la solución mezclada anterior a 3500 r/min durante 20 minutos y recoger la fase acuosa clara.

3. Agregue un volumen igual de etanol al 95% a la solución acuosa, revuelva lentamente con una varilla de vidrio mientras agrega y use papel de filtro para absorber el exceso de etanol del gel envuelto alrededor de la varilla de vidrio para obtener crudo. ADN. Disolverlo en agua destilada, ajustar el volumen a 50 ml y determinar el contenido de ADN mediante el método de la difenilamina.

4. Purificación: Coloque el ADN crudo obtenido anteriormente en 20 ml de solución de citrato trisódico de 0,015 mol/l NaCl-0,0015 mol/l y agregue 1 vez el volumen de la solución mixta de cloroformo y alcohol isoamílico. 10 min, centrifugar (4000 r/min, 65438). Centrifugar, desechar el sobrenadante y precipitar (ADN crudo). Finalmente, lavar el precipitado resultante dos veces con etanol absoluto y secar al vacío.