¿Qué son los anticuerpos monoclonales?
Introducción
En 1975, los biólogos moleculares G. J.F Koehler y C. Milstein establecieron la tecnología de hibridoma basada en la tecnología de hibridación natural. Fusionaron células de mieloma de ratón que pueden cultivarse y proliferar in vitro con células de bazo de ratón puras inmunizadas con antígenos para formar una línea celular híbrida, que no sólo tiene las características de las células tumorales que son fáciles de proliferar indefinidamente in vitro, sino que también tiene la Especificidad de síntesis y secreción de células formadoras de anticuerpos. Características de los anticuerpos. Estos hibridomas pueden cultivarse como células individuales para formar una línea celular única, una monoclonal. Mediante cultivo o inoculación intraperitoneal de ratones se puede obtener una gran cantidad de anticuerpos muy concentrados y muy uniformes, con la misma estructura, secuencia de aminoácidos y especificidad. Los anticuerpos secretados en diferentes momentos pueden permanecer iguales siempre que no muten durante el proceso. proceso cultural. estructura y función. Este anticuerpo monoclonal no está disponible mediante otros métodos.
Esta nueva tecnología resuelve fundamentalmente los problemas de larga data de especificidad y reproducibilidad en la preparación de anticuerpos y puede usarse para explorar ① la estructura fina de las proteínas; ② nuevos antígenos de superficie de subpoblaciones de linfocitos; ③ antígenos compatibles con tejidos; ⑤ Localización y clasificación de tumores; ⑥ Purificación de antígenos microbianos y parásitos; ⑦ Medicamentos combinados de inmunoterapia e inmunoquimioterapia (terapia "misil", que utiliza anticuerpos clonales únicos que se unen específicamente a las células diana y traen medicamentos). al foco. Por lo tanto, los anticuerpos monoclonales se pueden utilizar directamente para el diagnóstico, la prevención, el tratamiento y la investigación del mecanismo inmunológico de enfermedades humanas, abriendo amplias perspectivas para el inmunodiagnóstico y la inmunoterapia de tumores malignos humanos. Proceso de preparación
1. Inmunización de animales. La inmunización de animales es un proceso de inmunización de ratones con el antígeno diana para producir linfocitos B sensibilizados. Generalmente se seleccionan 6-8 hembras Balb/. Los ratones c se inmunizan según un plan de inmunización predeterminado. El antígeno ingresa a los órganos inmunes periféricos a través de la circulación sanguínea o linfática, estimulando la clonación, activación, proliferación y diferenciación de los linfocitos B correspondientes en linfocitos B sensibilizados. > 2. Fusión celular. Matar a los ratones mediante enucleación y sangrado, extraer el bazo mediante operación aséptica y exprimirlo y molerlo en un plato para preparar la suspensión de células de mieloma singénicas mezclada con células de bazo de ratón en una determinada proporción y añadir el. promotor de fusión polietilenglicol. Bajo la acción del polietilenglicol, varios linfocitos pueden fusionarse con células de mieloma para formar células de hibridoma.
3. , las células de mieloma no fusionadas mueren porque carecen de hipoxantina-guanina-fosforribosiltransferasa. Aunque los linfocitos no fusionados tienen hipoxantina-guanina-fosforribosiltransferasa, no pueden sobrevivir in vitro durante mucho tiempo y solo las células de hibridoma fusionadas pueden morir gradualmente. y proliferan en medio HAT porque obtienen hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa de los esplenocitos y tienen las características de proliferación ilimitada de células de mieloma
4 Detección de clones positivos para hibridoma y clonación. Las células cultivadas en medio HAT secretan anticuerpos monoclonales con especificidades predeterminadas, por lo que es necesario detectarlas y clonarlas. El método de dilución limitante se utiliza a menudo para clonar células de hibridoma y se utilizan métodos inmunológicos específicos para detectar células de hibridoma positivas que pueden producirlas. anticuerpos monoclonales requeridos, y clonar y amplificar el tipo, subtipo, especificidad, afinidad y especificidad de las inmunoglobulinas de los anticuerpos monoclonales que secretan. Después de una identificación completa de los epítopos, el peso molecular, etc., se congelan y almacenan de manera oportuna. /p>
5. Preparación a gran escala de anticuerpos monoclonales. La preparación a gran escala de anticuerpos monoclonales utiliza principalmente métodos de inducción animal y métodos de cultivo in vitro.
Inducción in vivo (1) Balb/c. ratones.
Primero, se inyectaron por vía intraperitoneal 0,5 ml de parafina líquida o norfitano como pretratamiento. 1-2 semanas después, se inocularon células de hibridoma en la cavidad peritoneal. Las células de hibridoma proliferan en la cavidad abdominal de los ratones y producen y secretan anticuerpos monoclonales. En aproximadamente 1 a 2 semanas, el abdomen de los ratones aumenta. Se puede obtener una gran cantidad de anticuerpos monoclonales extrayendo líquido ascítico con una jeringa.
(2) Método de cultivo in vitro, las células de hibridoma se cultivan en frascos de cultivo. Durante el proceso de cultivo, las células de hibridoma producen y secretan anticuerpos monoclonales. El sobrenadante del cultivo se recoge y se centrifuga para eliminar las células y sus restos para obtener los anticuerpos monoclonales necesarios. Sin embargo, la cantidad de anticuerpos producidos por este método es limitada. Constantemente surgen nuevas tecnologías y equipos de cultivo que mejoran enormemente la producción de anticuerpos.