¿Cuál es la relación entre los experimentos de curación de heridas y la apoptosis?

La detección de apoptosis puede: (1) usarse para estudiar diferentes tipos de muestras patológicas, incluidas células y tejidos tumorales; (2) usarse en diagnóstico y tratamiento clínicos, desarrollo de nuevos fármacos, desarrollo de productos biológicos, radioterapia y quimioterapia de tumores y genes tumorales de la perspectiva de promover la apoptosis celular. Tratamiento (3) Desempeña un papel importante en la detección temprana de enfermedades relacionadas y la evaluación de la eficacia de la radioterapia y la quimioterapia.

Método de doble marcaje con sonda fluorescente

Principio experimental

En este experimento, se utilizó 1 μg/ml de harringtonina HT para inducir la apoptosis de células HL-60 in vitro. Algunas células también mueren. La doble tinción con Hoechst33342 y yoduro de propidio (PI) puede distinguir células apoptóticas, necróticas y normales.

La cefotaxima sódica (HT) es un fármaco antitumoral que tiene buenos efectos en la leucemia mieloide aguda y la leucemia monocítica aguda. Los estudios han demostrado que la HT puede inducir apoptosis en células HL-60 en el rango de 0,02 ~ 5 μg/ml durante 2 horas y mostrar características típicas de apoptosis.

La membrana celular es una membrana biológica selectiva y los colorantes biológicos generales como el PI no pueden penetrar la membrana plasmática. Cuando las células están necróticas, la membrana plasmática está incompleta y el PI ingresa a las células y puede incrustarse en ADN o ARN para teñir las células necróticas, pero no tiñe las células apoptóticas ni las células vivas. Sin embargo, algunos tintes de células vivas son sustancias lipófilas que pueden atravesar la membrana celular y entrar en las células vivas, por lo que pueden teñirlas. Hoechst33342 es un tinte fluorescente reactivo menos tóxico y un derivado del bisbencimidazol. Se une específicamente al ADN (principalmente se une a la región de la base A-T) y aparece en células apoptóticas y células vivas. Cualquier célula con cuerpos apoptóticos es una célula apoptótica.

Materiales experimentales

Células HL-60 de leucemia promielocítica humana

Reactivos/kits

Tampón Tris-Hcl EDTA Solución de lisis alcalina SDS sodio acetato alcohol isopropílico etanol bromofenol azul indicador de sacarosa TBE tampón de electroforesis agarosa bromuro de etidio licor madre PI licor madre Ho33342.

Instrumentos/consumibles

Microscopio de fluorescencia instrumento de electroforesis tanque de electroforesis micromuestreador tubo centrífugo portaobjetos