Introducción básica al llenado de medios
El proceso de producción estéril es uno de los procesos más difíciles en el campo farmacéutico. Debido a que muchos productos farmacéuticos al final no se pueden esterilizar, debemos tratar de evitar la contaminación microbiana durante la exposición, como la preparación y el llenado. Hay muchos factores que afectan la esterilidad del producto, como el diseño del área de producción y la disposición de sus equipos, las condiciones ambientales durante el proceso de producción, la contaminación de todos los equipos y materiales relacionados con la producción, la operación del personal y las condiciones sanitarias, etc. Cada eslabón juega un papel importante en la calidad del producto final. Para garantizar la confiabilidad y adaptabilidad del sistema de proceso de producción aséptico, es necesario verificarlo mediante ciertos métodos de verificación. La mayoría de los fabricantes utilizan pruebas de llenado de medios para demostrar la confiabilidad de sus procesos asépticos. El artículo 47 del Apéndice 1 de las BPF de 2010 estipula claramente: "El número de recipientes de llenado del medio de cultivo debe ser suficiente para garantizar la validez de la evaluación. Para lotes pequeños de productos, el volumen de llenado del medio de cultivo debe ser al menos igual al volumen del lote". de productos. Llenado de simulación de medio de cultivo El objetivo de la prueba de llenado es cero contaminación y se deben seguir los siguientes requisitos: (1) Cuando la cantidad de llenado es inferior a 5000 piezas, no se detectarán contaminantes (2) Cuando la cantidad de llenado es entre 5.000 y 10.000 piezas: 1. Hay una pieza de contaminación que debe investigarse y se pueden considerar pruebas repetidas. 2. Hay dos piezas de contaminación que deben investigarse y volverse a verificar: 1. Hay dos piezas de contaminación que deben investigarse y volverse a verificar. una pieza de contaminación que debe investigarse; 2. Hay dos contaminaciones que deben investigarse y volverse a verificar (4) Se debe investigar cualquier contaminación microbiana "1 Requisitos previos para la prueba de llenado del medio de cultivo Primero, todos los equipos relevantes y. Los procesos deben ser confirmados o verificados con antelación. Por ejemplo, el ambiente en el área de producción limpia debe pasar una verificación estática (las partículas en suspensión, las bacterias planctónicas, las bacterias sedimentadas y los microorganismos de la superficie en el aire deben cumplir con las regulaciones correspondientes), la higiene y el comportamiento operativo de los operadores deben someterse a una capacitación estricta, y el equipo de producción principal (como máquinas llenadoras, máquinas de liofilización, etc.) y otros procesos auxiliares relacionados con la producción (como lixiviación, esterilización por calor húmedo)2. Prueba de llenado de medios 2.1 Selección de medios Para detectar tanto como sea posible los microorganismos que pueden contaminar el producto real en el sistema de proceso de producción aséptico, los medios seleccionados deben adaptarse al crecimiento de una variedad de microorganismos, incluyendo bacterias, mohos y levaduras. Antes de las pruebas de validación, se pueden utilizar los siguientes métodos para determinar la viabilidad del medio de validación. Primero, se prepara y esteriliza estrictamente de acuerdo con los requisitos del fabricante del medio de cultivo, y luego el medio de cultivo estéril se divide en una cierta cantidad de viales o tubos de ensayo estériles. Al mismo tiempo, prepare una suspensión de tres microorganismos [Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus y Candida albicans] y controle la concentración de la solución bacteriana a 100 ~ 1000/ml. Divida el medio de cultivo estéril preparado en tres partes iguales, con al menos dos frascos (tubos) en cada parte, y agregue 0,1 ml de suspensión bacteriana a cada una. El cultivo de Bacillus subtilis y Staphylococcus aureus se basa en 30 ~ 35 ℃, y el cultivo de Candida albicans se basa en 20 ~ 25 ℃. Si cada medio de cultivo microbiano tiene al menos 50 bacterias creciendo en 7 días, el medio de cultivo se considera aceptable para las pruebas de verificación del proceso de esterilidad. La práctica ha demostrado que para las pruebas de llenado de medios es adecuado un medio de caldo nutritivo o un medio de digestión con proteasa de soja. 2.2 Frecuencia de las pruebas de llenado del medio de cultivo: las nuevas líneas de producción asépticas o los cambios importantes en los procesos de producción deben pasar al menos tres lotes consecutivos de pruebas de llenado del medio de cultivo calificados para demostrar la confiabilidad del proceso verificado. La frecuencia de la reinspección en condiciones normales de producción es de al menos dos veces al año y cada vez se llena al menos un lote. Debido a que las condiciones climáticas varían en diferentes momentos, es importante considerar pruebas de llenado de medios durante cada turno de la operación de producción real. Si el medio se rellena debido a una prueba de llenado fallida, el tiempo de llenado (turno) debe ser el mismo que el tiempo de llenado inicial (turno). 2.3 Volumen de llenado y volumen de llenado En términos generales, el volumen de llenado de cada recipiente no debe ser inferior a un tercio de su volumen para garantizar que haya suficiente medio de cultivo para contactar completamente con la superficie interna del recipiente y observar fácilmente el crecimiento de microorganismos. Hay dos factores principales que deben considerarse al determinar el volumen de llenado del medio de cultivo. El primero es que se deben cumplir los requisitos estadísticos, es decir, se puede detectar una tasa de contaminación de al menos una milésima en el límite de confianza de 95; el segundo son los lotes de producción diarios reales del proceso de verificación;
Si es necesario investigar más a fondo los resultados del llenado del medio de cultivo, la identificación de bacterias contaminantes en la investigación de desviaciones desempeñará un papel muy importante. Encontrar la correlación entre las bacterias contaminantes y otros datos (como los datos de monitoreo ambiental) es un medio eficaz para examinar las desviaciones en los procesos asépticos. 2.8 Prueba de sensibilidad del medio de cultivo: seleccione aleatoriamente una cantidad adecuada de medio de cultivo de cada lote de medios de cultivo de relleno e inocule la siguiente suspensión bacteriana de prueba de acuerdo con el método de prueba de sensibilidad del medio de cultivo de la "Farmacopea China" (o "Farmacopea de los Estados Unidos" ) en el medio de cultivo. Cada cepa debe inocularse en al menos dos botellas de medio de cultivo de relleno, con un volumen de inoculación de 10 a 100 bacterias por botella. Tabla 1 Microorganismos utilizados en la prueba de sensibilidad del medio de cultivo Nombre del microorganismo Número de cepa Temperatura del cultivo (°C) Staphylococcus aureus 1 CMCC (B) 2603 30-35 Micrococcus luteus 2 CMCC (B) 28001 30-35 Candida albicans CMCC (F ) 98001 20- 25 Aspergillus niger ATCC 16404 20-251 Reemplazable 2 puede ser reemplazado por Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027. El medio de cultivo que contiene los microorganismos mencionados anteriormente se cultiva a la temperatura correspondiente. Al menos una botella de cada cepa debe mostrar un crecimiento evidente dentro de los 7 días; de lo contrario, se puede volver a analizar. Si los resultados de la prueba de sensibilidad no son calificados, la prueba de llenado del medio de cultivo para este lote no será válida y deberá volver a realizarse la prueba.
2.9 Control ambiental La confirmación y verificación ambiental del área de producción aséptica es el requisito previo para la verificación del proceso de producción aséptico. Los datos de monitoreo ambiental durante el proceso de llenado de medios desempeñarán un papel muy crítico en la evaluación y el análisis de desviación de todo el proceso de verificación. La cantidad de elementos de monitoreo ambiental y muestreo durante el proceso de llenado del medio de cultivo no debe ser menor que la cantidad de elementos de monitoreo ambiental y muestreo en la producción diaria. Resumir los datos de monitoreo ambiental diario y realizar análisis de tendencias basados en los datos de monitoreo ambiental durante el llenado del medio de cultivo y los resultados del llenado del medio de cultivo no solo puede evaluar objetivamente el plan de limpieza y desinfección y los estándares de higiene del personal implementados por la empresa, sino que también proporciona una base. Para formular racionalmente un entorno adecuado para la empresa, las normas de control (normas de advertencia y normas de rectificación) proporcionan la base.
2.10 Estándares de calificación y probabilidad de contaminación La evaluación de los resultados de llenado del medio de cultivo es un punto clave en la verificación de procesos de producción asépticos. Debido a diferentes interpretaciones de los criterios de elegibilidad, los mismos datos a menudo conducen a conclusiones diferentes. La Farmacopea de los Estados Unidos (U SP 24) estipula la tasa de contaminación de los medicamentos estériles de la siguiente manera:
El nivel de garantía de esterilidad (SAL) de los medicamentos terminalmente esterilizados no deberá ser inferior a 10-6, es decir, el la tasa de contaminación no deberá exceder un millón Una parte; el nivel de garantía de esterilidad (SAL) de los medicamentos llenados asépticos no deberá ser inferior a 10-3, es decir, la tasa de contaminación no deberá exceder una milésima.
La práctica ha demostrado que no es difícil mantener la tasa de contaminación del producto dentro de una milésima parte de una línea de producción estéril con un diseño razonable y un entorno operativo y de producción bien controlado. Las empresas deben demostrar mediante pruebas de llenado de medios que la probabilidad de contaminación de los productos estériles producidos por sus líneas de producción asépticas se mantiene en este nivel. Vale la pena señalar que los resultados de la verificación muestran que el nivel de garantía de esterilidad ha alcanzado 10-3, lo que no significa que el departamento de regulación de medicamentos permita 1 botella de producto contaminado por cada 1.000 botellas de productos comercializados. Más bien, se trata simplemente de un valor teórico de probabilidad de contaminación aceptable calculado a partir de datos de validación.
El mayor problema en la validación de procesos estériles son los resultados de una inspección no calificada en la investigación de desviaciones y la verificación de acciones correctivas. Esto requiere una investigación exhaustiva de las desviaciones y medidas correctivas efectivas. Basado en la experiencia real, este artículo enumera un conjunto de métodos de investigación y medidas correctivas después de desviaciones. 3.1 Investigación de desviaciones 1) Verificar los datos de calibración y registros de esterilización de todos los equipos de esterilización relacionados con los elementos de llenado de medios; 2) Verificar los datos de monitoreo ambiental durante el llenado de medios, incluidas partículas de aire, bacterias planctónicas, bacterias de sedimentación, datos de monitoreo de la salud de los microorganismos de la superficie y operadores 3) Identificar las bacterias contaminantes en el medio de cultivo y los microorganismos monitoreados durante el monitoreo ambiental uno por uno, y comparar la correlación entre las bacterias contaminantes 4) Ver datos históricos de resultados positivos de las pruebas de esterilidad de productos relacionados, para ver si las bacterias contaminantes son; consistente con los de la prueba de verificación del medio de cultivo 5) Verificar los datos de llenado del medio de cultivo anterior para ver si las bacterias contaminantes se repiten 6) Verificar la integridad del recipiente y del tapón de goma para llenar y sellar el medio; Verificar si el registro de diferencia de presión en el área limpia estéril durante el llenado del medio cumple con la rutina; 8) Verificar los registros de mantenimiento y limpieza durante el llenado del medio; 9) Verificar los registros de producción del lote y los registros de operación del equipo durante el llenado del medio;
3.2 Acción correctiva: Debemos revisar y analizar cuidadosamente todos los datos de llenado de medios y los datos relacionados para identificar con precisión la causa real de esta desviación. Aunque se pueden detectar microorganismos en el seguimiento ambiental, en la mayoría de los casos es difícil encontrar una correlación directa entre ellos y las desviaciones reales. Una vez que ocurre una desviación y se completa una investigación, se debe implementar un plan correctivo de inmediato. A continuación se enumeran algunos procedimientos operativos básicos al implementar un plan de remediación. 1) Aumentar el volumen de llenado del medio de cultivo y los datos de monitoreo ambiental para encontrar la fuente de contaminación; 2) Fortalecer las medidas de limpieza y desinfección del ambiente de producción estéril 3) Aumentar los datos de monitoreo ambiental estático antes del llenado para verificar la confiabilidad del estéril; condiciones ambientales 4) desafiar el desinfectante con bacterias contaminadas en el medio de cultivo para verificar si las bacterias contaminadas son resistentes al desinfectante 5) antes, durante y después del llenado, aumentar el control de higiene de los operadores (superficie de los guantes, microorganismos de operación en el; superficie del servicio); 6) Aumentar el lote de llenado de medio de cultivo y comprobar si la desviación es accidental. Resumen Actualmente, mi país ha establecido estándares de aseguramiento de la esterilidad y estándares de verificación para procesos de producción asépticos. Dada la necesidad de integración internacional, debemos comprender y dominar las tecnologías, estándares y experiencias avanzadas extranjeras para acelerar la mejora de la competitividad de los medicamentos de nuestro país en el mercado internacional y aumentar las exportaciones de medicamentos. La prueba de llenado del medio de cultivo presentada en este artículo es solo un método en la verificación de procesos de producción asépticos y refleja el nivel avanzado y los requisitos de este campo en el mundo actual. Sin embargo, debido a la diversidad y complejidad del procesamiento aséptico en sí, es difícil cubrir todos los detalles. Este artículo sólo explica los problemas comunes en la prueba de llenado del medio de cultivo.
Materiales de referencia:
1 y Apéndice 1 de Medicamentos Estériles de la versión 2010 de “Buenas Prácticas de Fabricación de Productos Farmacéuticos”.
2. Verificación del proceso de producción aséptico.