Principios de la secuenciación del genoma de alto rendimiento

El protocolo de secuenciación se basó en el método de secuenciación didesoxi (Sanger et al., 1977). Para realizar la secuenciación por pares de insertos de cada clon, se deben proporcionar dos placas de reacción de secuenciación circular de 384 pocillos por placa de ADN plantilla de plásmido.

La reacción de secuenciación utiliza Big Dye Terminator Chemistry versión 3.1 (Applied Biosystems) y M13 estándar o cebadores directos y cebadores inversos de uso común. Las reacciones de secuenciación se configuraron utilizando una estación de trabajo de pipeteo biomefx (Beckman).

El manipulador es responsable de dividir en alícuotas la muestra plantilla y mezclarla con la solución de reacción, que contiene didesoxinucleótidos, nucleótidos marcados fluorescentemente, TaqDNA polimerasa, cebadores de secuenciación y tampones.

Las plantillas y las placas de reacción tienen códigos de barras, y el lector de códigos de barras de la estación de trabajo de pipeteo BiomekFX las rastreará para garantizar una transferencia sin errores de las plantillas y las soluciones de reacción. Se ciclaron continuamente de 30 a 40 pasos de amplificación lineal en MJResearch Tetrads o en un termociclador 9700 (applied Biosystems).

Datos ampliados:

Desarrollo de tecnología:

Plataforma de secuenciación de alto rendimiento (base de datos de secuenciación de genoma de alto rendimiento) iniciada en 2005, 454 vidas científicas Corporation (adquirida formalmente por Roche en 2007) lanzó la plataforma de pirosecuenciación 454 FLX.

Applied Biosystems (ABI), que una vez lanzó el analizador de ADN 3730xl, ha comenzado a sacudir su posición de liderazgo que siempre ha ocupado la mayor cuota del mercado de secuenciación.

Debido a que su producto estrella, una serie de secuenciadores de electroforesis de matriz capilar, se ha topado con dos fuertes competidores, uno de ellos es el secuenciador 454 de Roche.

La otra es la plataforma analizadora de genoma Solexa lanzada por la empresa estadounidense Illumina en 2006. Con este fin, ABI lanzó su propio secuenciador de estado sólido en 2007. Estas tres plataformas de secuenciación son representantes de las plataformas de secuenciación de alto rendimiento actuales.

Enciclopedia Baidu-Secuenciación de alto rendimiento del genoma