Estado actual y perspectivas de la terapia génica
Terapia génica para el SIDA
Terapia génica para enfermedades genéticas
La investigación en terapia génica generalmente cumple con los siguientes requisitos
① Sí Enfermedad defectuosa de un solo gen que se ha identificado;
② Solo células somáticas
③ Afinidad y operabilidad de las células diana
④ Efecto curativo significativo, no; o Peligro bajo.
⑤ El nivel de expresión es estable a largo plazo;
⑥ Debe haber una base de experimento con animales.
Han comenzado los ensayos clínicos de terapia génica con células humanas. La terapia génica debe cumplir las siguientes condiciones:
① Seleccionar la enfermedad adecuada y tener una comprensión clara de su patogénesis y la estructura y función del gen correspondiente.
② El corrector de la enfermedad; el gen ha sido clonado y comprende el mecanismo y las condiciones de su expresión y regulación.
③ El gen tiene células receptoras adecuadas y puede expresarse eficazmente in vitro.
④ Hay; Para encontrar vectores y métodos de transferencia seguros y eficaces, existen modelos animales disponibles.
La terapia génica clínica se ha realizado en varias enfermedades genéticas y tumores humanos de un solo gen.
1. Terapia génica para el síndrome de inmunodeficiencia compleja
En 1991, Estados Unidos aprobó la primera terapia génica con células somáticas para una enfermedad genética, la adenosina desaminasa (ADA), introducida en un 4 Niña de 10 años con síndrome de inmunodeficiencia compleja grave (SCID). Se utiliza un método indirecto mediado por retrovirus, es decir, los leucocitos de los niños se cultivan con un vector retroviral que contiene el gen de la adenosina desaminasa humana normal, se estimulan con interleucina-2 (IL-2) y luego se transfunden mediante natación estática unos 10 días después. Nota para niños. Trate cada 1-2 meses. Después de 8 meses, el nivel de ADA del niño alcanzó el 25% del valor normal y no se encontraron efectos secundarios obvios. Luego se trató el segundo caso con efectos similares.
2. Terapia génica para el melanoma La terapia génica para los tumores es muy esperada. A partir de diversas exploraciones, descubrimos el papel de los linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) en el tratamiento de tumores. En 1992, se implementaron los protocolos TNF/células tumorales e IL-2/células tumorales, es decir, el gen del receptor del factor de necrosis tumoral (TNF) del gen IL-2 se introdujo en las propias células tumorales del paciente y se cultivó, y luego Estas células tumorales cultivadas se inyectan en las nalgas del paciente. Después de 3 semanas, se extirparon el lugar de la inyección y sus ganglios linfáticos de drenaje y se cultivaron células T en condiciones apropiadas. Las células T expandidas se administran a los pacientes en combinación con IL-2. Resultados Entre los 5 pacientes con melanoma, 1 tuvo una regresión tumoral completa, 2 tuvieron una regresión tumoral del 90% y los otros 2 murieron 9 meses después del tratamiento. Dado que los linfocitos infiltrantes de tumores transportados por el factor de necrosis tumoral pueden acumularse en los tumores, la aplicación de linfocitos infiltrantes de tumores mejora el efecto letal sobre los tumores.
3. Terapia génica para otras enfermedades genéticas
La fibrosis quística es muy común en personas caucásicas y progresa rápidamente. Para la terapia génica de la DMD, se han logrado algunos avances gracias a la existencia de modelos animales de ratón. Por ejemplo, en 1993, Francia inyectó con éxito Ad-RSVmDys (gen de distrofina recombinante del virus adenovirus-Ros) en ratones. Es decir, se utilizó adenovirus como vector, se recombinó con el ADNc del gen de la distrofina y se inyectó en el músculo bajo la activación del promotor RSV, lo que demuestra que puede expresarse en el músculo de ratones mdy. Además, también se están estudiando algunas enfermedades genéticas como la hemofilia, la talasemia y la enfermedad de Gaucher.
El Dr. Kong Dehua de la Universidad de Zhejiang y otras unidades también han realizado exploraciones significativas en terapia génica para la hemofilia b. Basándose en el modelo de conejo, utilizaron plásmido recombinante (pcmvix) o retrovirus recombinante (N2CMVIX). gen del factor IX humano en fibroblastos de piel autólogos y logró resultados prometedores. Creo que la terapia génica tendrá éxito en China en un futuro próximo.
4. Tecnología antisentido
La tecnología de oligodesoxinucleótido antisentido (también conocido como oligodesoxinucleótido antisentido) se refiere al uso de ARN antisentido y ADN antisentido sintetizados artificialmente que bloquean la transcripción o replicación de genes y controlan el crecimiento celular. a medio plazo, y provoca que la proteína codificada por el gen se transcriba a ARNm de forma que no pueda traducirse a la proteína correspondiente, consiguiendo así el objetivo de tratar una determinada enfermedad. El ADN antisentido se ha utilizado en ensayos clínicos para algunos cánceres. Esta tecnología antisentido sólo puede considerarse como una tecnología terapéutica a nivel genético. Funcionan de diferentes maneras en la replicación, transcripción y traducción del ADN.
Debido a su pequeño peso molecular, tiene el potencial de ingresar a las células diana, pero su estabilidad clínica, toxicidad, permeabilidad celular y otros aspectos requieren más investigación.
5. Drug targeting (dirigido a fármacos)
El mecanismo de este método se puede resumir como terapia con profármacos enzimáticos dirigidos por virus (VDEPT), es decir, el uso externo de vectores retrovirales. El gen fuente se transfiere al interior de la célula. El gen codifica una enzima que convierte profármacos inofensivos en complejos citotóxicos. Los vectores virales que portan este gen sólo se expresan en tejidos especiales o células tumorales, pero no en células normales. Por ejemplo, la citosina desaminasa puede convertir la inofensiva 5-fluorocitosina (5-FC) en la citotóxica 5-fluorocitosina (5-FC). Este virus puede infectar células normales y células cancerosas, pero este gen enzimático sólo puede expresarse en células tumorales después de conectarse a un "interruptor molecular". Sikora et al. diseñaron un "minigen quimérico" que ligaba el gen de la enzima aguas abajo del promotor del gen erbB2 para mejorar la actividad del promotor y sobreexpresar erbB2 en células de cáncer de mama. En este momento, se inyecta el fármaco 5-FC en las células y se convierte en 5-Fu, lo que provoca la muerte de las células cancerosas. Sin embargo, cuando se administró 5-FC a células que contenían este gen quimérico pero sin expresión de erbB2, no hubo actividad profármaco. Esta nueva estrategia de terapia génica tiene el potencial de permitir la terapia génica para diferentes enfermedades, incluidos los tumores.
Se ha aprobado para tratar unos 120 casos, de los cuales unos 110 eran tumores. Desafortunadamente, todos los tratamientos, excepto el melanoma, fracasaron. Se han tratado más de 10 casos de enfermedades monogénicas. A excepción de la deficiencia de ADA y la hemofilia B, todos los demás aún se encuentran en etapa experimental. Pero ya no hay duda de que la terapia génica no sólo es posible sino que está a la vuelta de la esquina.