Descripción general de los ratones genéticamente modificados

Normalmente, la tecnología de activación in situ (KI) se utiliza para activar el genoma de Cre en un promotor específico.

Según las diferentes posiciones, se divide en dos categorías:

① Después de introducir el gen Cre en el primer codón de inicio del promotor, después de insertar el codón de inicio, la proteína Cre; El nivel de expresión es alto, pero puede afectar la expresión de la proteína posterior;

② Introducir el gen Cre en el promotor antes del terminador de proteína posterior; el nivel de expresión de la proteína Cre insertada antes del terminador es relativamente bajo; pero no afectará la expresión normal de la proteína.

Método de inducción Cre adicional.

El sistema Cre-Loxp se utiliza principalmente para regular la expresión inducible de genes diana. Cuando dos sitios Loxp están ubicados en el mismo cromosoma y en la misma dirección, la recombinasa Cre corta específicamente la secuencia entre los dos sitios Loxp. Construya el vector de direccionamiento Rosa26-(SA/PCAG)-LOXP-STOP-LOXP(LSL)-cDNA-PA, transfiéralo a células ES, obtenga el clon ES con recombinación homóloga correcta en la posición objetivo de Rosa 26 e inyéctelo en la masa celular interna de blastocistos de ratón, para obtener ratones quiméricos. Se obtuvieron ratones knock-in con recombinación homóloga correcta de células ES mediante reproducción con ratones de tipo salvaje. Los ratones knock-in se pueden cruzar con una variedad de ratones que expresan la recombinasa Cre para obtener modelos de ratón con expresión específica de tejido.

Principio: Diseñar y sintetizar sgRNA basado en la secuencia del gen Rosa26, construir un fragmento que contenga secuencias homólogas y secuencias diana, e inyectarlo en el citoplasma de óvulos fertilizados de ratón junto con el mRNA de la nucleasa Cas9*** . El ARNm y el ARNsg de Cas9 se combinan con la secuencia diana genómica para cortar el ADN bicatenario, utilizan la secuencia homóloga que contiene el fragmento diana como plantilla para reparar el ADN genómico y finalmente obtienen un ratón en el que el fragmento se inserta en el intrón del Gen Rosa26.

Gt: Trampa genética

β-gal: β-galactosidasa, un gen reportero clásico.

β-Geo: Otro plásmido reportero que fusiona los genes gal y neo&Geo;Dave. 1991.5: 1513-1523.

Se puede ver por analogía.

Apéndice: reglas de nomenclatura del mouse Jax