¿Cuáles son los métodos de pruebas genéticas?
Existen innumerables métodos para realizar pruebas genéticas. Los pasos básicos son la adquisición de muestras (incluidas muestras de sangre, saliva y tejido), el procesamiento (como la extracción y purificación de ADN, la construcción de bibliotecas, etc.), y la secuencia. determinación - análisis de secuencia - Interpretación de resultados - redacción de informes. Un método de secuenciación de ácidos nucleicos ampliamente utilizado es la secuenciación directa. Actualmente, los métodos e instrumentos más avanzados y utilizados incluyen el método de secuenciación Sanger de primera generación y el método de secuenciación de alto rendimiento de segunda generación (como el secuenciador Hiseq de la empresa estadounidense Illumina y el método de secuenciación desarrollado por CompleteGenomics, una filial de BGI). Actualmente también han surgido métodos llamados tecnología de secuenciación de tercera generación, como la secuenciación de ADN de una sola molécula en tiempo real.
Primera generación: secuenciación Sanger
La ventaja de la tecnología de secuenciación Sanger de primera generación es que la longitud de lectura de la secuenciación puede alcanzar 800-1 Kbp y el tiempo de secuenciación es corto, ya que solo toma Se puede completar la secuenciación en unos pocos minutos, por lo que la precisión de la secuenciación es alta y sigue siendo el estándar de oro para la secuenciación. Las desventajas son el bajo rendimiento y el alto costo.
Segunda generación: secuenciación de alto rendimiento (NGS)
Las ventajas de la tecnología de secuenciación de segunda generación son un alto rendimiento de secuenciación, alta eficiencia y bajo costo; la desventaja es la longitud de lectura; de secuenciación Generalmente es más corto y lleva más tiempo. Tomando como ejemplo el secuenciador Hiseq2000 de Illumina, uno de los secuenciadores más utilizados en la actualidad, la salida de una secuenciación puede llegar a 500.
Gb, pero la longitud de lectura es de 100 pb, lo que lleva unos 14 días. El secuenciador IonProton de Life Technology Company determina la secuencia de bases mediante pequeñas diferencias en el potencial del sistema de reacción durante la síntesis.
Tercera generación: secuenciación de una sola molécula/nanoporo
Dado que la tecnología de segunda generación tiene las desventajas de un tiempo de lectura corto y un consumo de tiempo prolongado, la gente espera que la tecnología de secuenciación de tercera generación pueda resolver estos problemas. Hay defectos, por lo que la tecnología de secuenciación de tercera generación aún no está completamente madura y su aplicación en el mercado no está muy extendida entre los distintos secuenciadores, y los principios de secuenciación también son diferentes. Por ejemplo, Pacific Biosciences utiliza un microscopio para detectar la fluorescencia liberada después de la reacción de los dNTP marcados con fluoróforos durante la síntesis de ADN por PCR. El secuenciador desarrollado por la Universidad de Oxford, que aún no ha entrado en producción, realiza la secuenciación detectando los nucleótidos que "caen" en los microporos de detección cuando la exonucleasa corta el ADN.