¿Por qué necesitamos dos exámenes para preparar anticuerpos monoclonales?

(1) Objetos de detección: células del bazo, células tumorales, células del bazo-bazo, células tumorales-del bazo, células del bazo-tumorales (es decir, glóbulos rojos de oveja, células del bazo de ratón inmunizadas y mieloma de ratón). mezcla de células). Además, una pequeña cantidad de agregados multicelulares no requieren un examen especial debido a su corta vida útil y su rápida muerte.

(2) Método de detección: use medio selectivo HAT para detectar células que crecen normalmente. (Nota: el medio HAT contiene hipoxantina H, aminopterina A y timidina T. Entre ellos, la aminopterina puede bloquear la vía principal de síntesis de ácido nucleico y la hipoxantina se puede sintetizar bajo la catálisis de la fosforribosiltransferasa HGPRT. El ARN o la timidina pueden sintetizar ADN bajo la catálisis. de timidina quinasa TK, que es una vía secundaria de síntesis de ácido nucleico)

(3) Resultados de la detección: las células tumorales esplénicas crecen normalmente y otras células morirán. (Motivo: la aminopterina bloquea la vía principal de síntesis de ácido nucleico en las células del bazo y en las células del bazo. Aunque existe una vía de derivación para la síntesis de ácido nucleico, no puede proliferar durante mucho tiempo; las células tumorales y las células tumorales son en la vía de derivación para la síntesis de ácidos nucleicos. En ausencia de enzimas, la vía principal de síntesis de ácidos nucleicos está bloqueada por la aminopterina, por lo que muere debido al trastorno de la síntesis de ácidos nucleicos, aunque la vía principal de síntesis de ácidos nucleicos está bloqueada por. aminopterina, las células tumorales del bazo tienen enzimas de la vía de derivación para la síntesis de ácido nucleico en las células del bazo, pero pueden usar hipoxantina y timidina en el medio de cultivo para sintetizar ácido nucleico y sobrevivir)

Segundo examen:

(1) Objetos de cribado: hibridación policlonal. (Es decir, una población mixta de células tumorales esplénicas que producen una variedad de anticuerpos).

(2) Método de detección: detección de anticuerpos (como tecnología de inmunofluorescencia, radioinmunoensayo, etc.), que en realidad utiliza dilución. método para que las células de hibridoma se cultivan individualmente en pocillos de microplacas de vinilo y luego se examinan para determinar su capacidad de producir anticuerpos específicos en cada pocillo).

(3) Resultados del cribado: células de hibridoma que producen anticuerpos específicos.