¿Cuáles son los procedimientos de modificación múltiple?
El concepto y los métodos de modificación de la modificación de polipéptidos
El concepto y los métodos de modificación de la modificación de polipéptidos
Hace 1 año
Biología de péptidos profesional de Hangzhou
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Antecedentes y descripción general
Los polipéptidos tienen importantes ventajas estructurales, es decir , pueden ser En el caso de afectar al fragmento de polipéptido funcional original, se introduce una nueva secuencia de polipéptido funcional en uno o ambos extremos del polipéptido mediante síntesis o biosíntesis en fase sólida para obtener un péptido de fusión multifuncional. El mecanismo por el cual los liposomas sensibles al pH con capacidad de unión a receptor/ligando entran en las células es a menudo diferente del modo de fusión de los liposomas ordinarios. Por ejemplo, la combinación de RGD/αV β3 o transferrina/TfR inducirá que las células tumorales endocitosen activamente los liposomas y luego liberen fármacos/ácidos nucleicos. Este es el proceso de liberación de dichos liposomas sensibles al pH modificados con péptidos. Las modificaciones de polipéptidos comunes se pueden dividir en cuatro categorías según los sitios de modificación: modificación C-terminal (amidación, sulfatación, etc.), modificación N-terminal (acetilación, ácido graso, etc.) y modificación de residuos intermedios (modificación por glicosilación combinada). con modificaciones de fosforilación de Ser-, Tyr-, Asn- y Thr- combinadas con Ser-, Tyr- y Thr-) y modificaciones de ciclación. Actualmente, la investigación sobre la modificación de péptidos se ha convertido en un tema candente.
Método de modificación
1. Método químico
Es el método de modificación más maduro y ampliamente utilizado en la modificación de polipéptidos, que incluye principalmente el método en fase líquida y el método en fase sólida. . Ley.
1) Método en fase líquida
El método en fase líquida es un método clásico con ventajas únicas en el control de la pureza y la producción a gran escala. En la modificación por ciclación de péptidos, para evitar reacciones intermoleculares para formar dímeros y polímeros lineales o cíclicos, la reacción debe llevarse a cabo en una solución altamente diluida (10-3 ~ 10-4 mol/L). Sin embargo, en condiciones tan altamente diluidas, a menudo existen limitaciones, como un tiempo de reacción prolongado y más reacciones secundarias, lo que añade inconvenientes al posprocesamiento. En respuesta a esta situación, se utilizó silano dendrítico con mayor impedimento estérico como agente condensante en lugar de carbodiimida, en lugar del reactivo convencional diciclohexilcarbodiimida (DCC), para sintetizar el péptido cíclico de lactama en solución, y se obtuvo la pureza de los compuestos objetivo más altos.
2) Método de fase sólida
El método de fase sólida se usa ampliamente en la modificación de péptidos porque es fácil de separar y purificar el rendimiento y la pureza de la separación de la modificación del polipéptido sintetizado. este método son obviamente altos en el método de fase líquida. En la síntesis de péptidos en fase sólida, los residuos de aminoácidos C-terminales se conectan al portador y luego se ensamblan los aminoácidos restantes, lo que tiene obstáculos inherentes a la síntesis de péptidos modificados C-terminales. La leuprorelina (Py R-HIS-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-EU-Arg-Pro-NHET) se sintetizó en estado sólido utilizando la resina común de cloruro de 2-clorotritilo como vehículo. Después de la etilación a 25°C durante 5 minutos, la cadena lateral se escinde directamente, logrando un acoplamiento continuo de las etapas de etilación del péptido y escisión de la cadena lateral, y evitando el aislamiento y la purificación de productos intermedios.
3) Método enzimático
Las enzimas tienen grandes ventajas en la estereoselectividad de los sitios de modificación y en condiciones de reacción de síntesis suaves, rápidas y eficientes. La síntesis de glicopéptidos consiste en injertar glicosilaminoácidos en oligopéptidos mediante una reacción de condensación enzimática y luego completar modificaciones adicionales de oligosacáridos mediante glicosiltransferasas. Esta reacción enzimática se puede realizar en solución acuosa con una protección mínima. Sin embargo, esta enzima también tiene ciertas limitaciones, como ser de una sola fuente y no ser fácil de obtener. Además, la secuencia de aminoácidos de la cadena peptídica en el sustrato puede afectar su eficacia de modificación. Cuando se conecta enzimáticamente galactosamina a péptidos para sintetizar glicopéptidos, se encuentra que el rendimiento de la reacción depende de la estructura y la glicosilación del sustrato y es generalmente bajo. Con el desarrollo de la tecnología del ADN y la profundización de la investigación, las enzimas desempeñarán un papel cada vez más importante en la modificación de polipéptidos.
4) Acoplamiento de enzimas químicas
El uso de métodos químicos y enzimáticos para estudiar las modificaciones de péptidos puede reducir la contaminación causada por el uso excesivo de reactivos químicos y garantizar un rendimiento catalizado por enzimas.
Síntesis en estado sólido de derivados de endomorfina-1 conjugados N-terminal * * * y luego unión del compuesto de N-acetilglucosamina al glicopéptido sintetizado químicamente bajo la catálisis de glicosiltransferasa para formar el producto objetivo análogos de morfina-1 del tripéptido N-terminal. Este proceso de síntesis requiere sólo una protección mínima. sialylew es