¿Qué procesos se requieren antes de que las células de hibridoma se expandan y cultiven?
Necesita someterse a aislamiento y cribado, y luego ampliar la cultura.
Utilice 8-azaguanina (un análogo de purina) para detectar células tumorales. Puede participar en la vía de derivación de la síntesis de ácido nucleico, pero el ácido nucleico sintetizado no puede tener las mismas propiedades que el ácido nucleico normal. por lo que estas células morirán y las células que sobrevivan no podrán sintetizar ácidos nucleicos mediante derivación. La esencia de este proceso es detectar líneas celulares deficientes en HGPRT.
Las líneas celulares deficientes en HGPRT se fusionan con células B. Las células fusionadas pueden sintetizar ácidos nucleicos tanto a través de la vía principal como de la vía de derivación. Sin embargo, las células tumorales no fusionadas y las células de autofusión de células tumorales siguen siendo nucleares. Los ácidos sólo pueden sintetizarse a través de la vía primaria.
Información ampliada:
Principios y métodos de cribado:
Después de la fusión celular, el cultivo selectivo de células de hibridoma es la clave para el primer cribado. El medio selectivo HAT comúnmente utilizado: hipoxantina (H), aminopterina (A) y nucleótido de timina (T) se añaden al medio de cultivo de células animales ordinario. La base es que existen dos vías para la síntesis de ADN en las células:
Una vía es la vía biosintética ("vía D?"), que es la síntesis de aminoácidos a partir de aminoácidos y otros compuestos de moléculas pequeñas. , que es la síntesis de moléculas de ADN. Proporcionar materias primas. En este proceso de síntesis, el ácido fólico participa en este proceso como una coenzima importante, y la aminopterina en el medio de cultivo HAT es un antagonista del ácido fólico que puede bloquear la vía D de la síntesis de ADN.
La otra vía es la vía de emergencia ("vía S", que utiliza la hipoxantina-guanina fosfato nucleósido transferasa y la timidina quinasa para catalizar la hipoxantina y la timina para generar el correspondiente nucleósido glucósido, ambas enzimas son indispensables.
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