Informe del procedimiento de prueba de coliformes

Los coliformes se refieren a un grupo de bacterias que pueden fermentar la lactosa, producir ácido (el color original del medio de cultivo es rojo, y se volverá amarillo si se produce ácido), producir gas, ser aeróbicos y facultativos. anaerobios. Bacilos Langerhans negativos. Si se detectan bacterias coliformes en los alimentos, significa que los alimentos han sido contaminados por las heces. Los resultados se informan como el número más cercano de coliformes (MPN) por 100 ml (g) de muestra

Equipos y materiales:

1 Incubadora: 36±1 grados

3. Baño de agua a temperatura constante: 44,5 ± 0,5 grados

4. Balanza

5. p>

6. Homogeneizador o benceno de leche

7. Placa de Petri: 90 mm de diámetro

8. >

10. Frasco o matraz Erlenmeyer: la capacidad es de 500 ml

11. Cuentas de vidrio: el diámetro es de aproximadamente 5 mm

12. Gradilla para tubos de ensayo

Medio y reactivos:

1. Tubo de fermentación de sales biliares de lactosa

2 Placa de agar eosina azul de metileno

3. . Tubo de fermentación de lactosa

4. Caldo EC

5. Diluyente tampón fosfato

6. Solución salina fisiológica.

7.

Pasos de operación:

7.1). Dilución de la muestra.

7.1.1 Diluir la muestra en 25 ml (o g) Colocarla en una botella de vidrio que contenga 225 ml de. solución salina fisiológica estéril u otras diluciones (se coloca una cantidad adecuada de perlas de vidrio en el frasco) o leche benceno estéril, y agítelo o tritúrelo bien para obtener una dilución uniforme de 1:10. Lo mejor es utilizar un homogeneizador para procesar la muestra sólida a una velocidad de 8000-10000 r/min para obtener una dilución uniforme de 1:10.

7.1.2 Utilice una pajita estéril de 1 ml para absorber 1 ml de dilución 1:10, inyéctelo en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución salina estéril u otros diluyentes, agite el tubo de ensayo para mezclar y haga un 1 :100 dilución

7.1.3 Tome otra pajita estéril de 1 ml y realice una dilución incremental 10 veces de acuerdo con la operación anterior. Para cada dilución incremental, use una pajita estéril de 1 ml.

7.1.4 Con base en los requisitos de las normas de higiene alimentaria o la estimación de la contaminación de la muestra problema, seleccionar tres diluciones e inocular 3 tubos por cada dilución.

7.2 Prueba de fermentación de lactosa

Inocular la muestra a analizar en el tubo de fermentación de lactosa y sales biliares. Si el volumen de inoculación es superior a 1 ml, utilizar lactosa de doble material y. tubo de fermentación de sales biliares. Inocular 3 tubos por cada dilución, colocar en una incubadora a 36±1 grados e incubar durante 24±2 horas. Si todos los tubos de fermentación de lactosa y sales biliares no producen gas, se puede informar como coliforme negativo. , Luego proceda de acuerdo con los siguientes procedimientos.

7.3 Cultivo de aislamiento

Transfiera los tubos de fermentación productores de gas a placas de agar eosina azul de metileno, colóquelos en una incubadora a 36 ± 1 grados y cultive durante 18-24 horas. sáquelo, observe la morfología de la colonia y realice tinciones de Gram y pruebas experimentales.

7.4 Prueba de confirmación

En la placa anterior, seleccione 1-2 coliformes sospechosos para la tinción de Gram y, al mismo tiempo, inocule el tubo de fermentación de lactosa y colóquelo a 36 ± 1 grados. Incubar en la incubadora durante 24 ± 2 horas y observar la producción de gas. Si el tubo de lactosa produce gas y la tinción de Gram es negativa, los bacilos libres de pulgón pueden reportarse como coliformes positivos.

7.5 Informe

De acuerdo con el número de tubos confirmados como coliformes positivos, consulte la tabla de recuperación de NMP e informe el valor de NMP por 10 ml (g) de coliformes.

8 Coliformes fecales

8.1 Utilice un asa de inoculación para transferir todos los cultivos del tubo de fermentación de sales biliares y lactosa que producen gas (ver 7.2) al tubo de caldo EC y coloque 44,5 en un Baño de agua de ±0,2 °C (la superficie del agua en el baño de agua debe ser superior al nivel del caldo EC), incubar durante 24 ± 2 horas. Después de la incubación, si todos los tubos del caldo EC no producen gas, se puede informar como negativo. Si hay producción de gas, transfiera todos los caldos EC que producen gas a placas de agar con eosina azul de metileno y cultívelos a 36 ± 1 grados durante 18 a 24 horas. Si hay colonias típicas en las placas, se confirma que son fecales. intestino grueso. Bacterias positivas.

8.2 Informe de resultados

De acuerdo con el número de tubos positivos confirmados como coliformes fecales, consulte la tabla de recuperación de NMP e informe el valor de NMP de coliformes fecales por 100 ml (g)