Cómo medir la cantidad de polímero extracelular EPS

(1) Los polímeros extracelulares (EPS) están estrechamente unidos a las células y requieren métodos especiales para separarlos del lodo. En este experimento, el P.? Lund et al. [Método] Extracción de polímeros extracelulares en la superficie de lodos activados.

Primero se sacan 50 ml de muestra de lodo activado del reactor, se centrifugan a 2000 g durante 65438 ± 05 minutos a temperatura ambiente y luego se vierte el sobrenadante. Después de la centrifugación, ¿526 mg? ¿L-1 NaCl, 74,56 mg? ¿L-1KCl, 760,2 mg? ¿L-1Na3PO4 y 552 mg? Tampón fosfato L-1NaH2PO4 para resuspenderlo en forma líquida. Luego transfiera la muestra de lodo suspendido al vaso de precipitados y agregue 90 g. resina de intercambio iónico GMLVSS-1 (resina de intercambio catiónico 732) y se agitó a 600 rpm durante 2 horas para mezclarlos. Después de mezclar, centrifugar a 4000 g durante 300 minutos para eliminar la resina y la materia orgánica, y el sobrenadante es extracto de EPS[].

(2) Método de análisis de polímeros extracelulares El extracto de EPS contiene principalmente polisacáridos, proteínas y ADN. Los polisacáridos se determinaron mediante el método colorimétrico de antrona-ácido sulfúrico []. Es decir, los azúcares serán deshidratados por H2SO4 a altas temperaturas para formar furfural o derivados de furfural, que se condensarán con antrona (C1410O) para formar un compuesto azul. Mida la absorbancia a 620 nm (espectrofotómetro 721) y el contenido de polisacárido se puede convertir a partir de la curva estándar de glucosa [,].

Utilice el método de absorción UV para medir las proteínas y mida la absorbancia a 260 nm y 280 nm al mismo tiempo. La concentración de proteína se calculó mediante la siguiente fórmula (mg? ML-1): ρ proteína = 1,45×A280nm-0,74×A260nm. Este método elimina la interferencia de los cálculos de neutralización de muestras. El contenido de EPS se basa en última instancia en la cantidad total de cada componente en unidad de masa de MLVSS.

El ADN se midió mediante el método de Brunk modificado []. Los reactivos principales son: reactivo DAPI 0,2 ppm (4,6-dimida-2-fenilindol), EDTA 10 mM, TRIS 10 mM, pH 7. Pasos: ¿Cambiar a 100? Utilice una pipeta para colocar 1 litro de extracto de EPS en un tubo de ensayo y agregue 2,5 ml de los reactivos anteriores. La muestra (longitud de onda de excitación 360 nm, longitud de onda de emisión 450 nm) se midió directamente y el experimento con salmón utilizó métodos estándar.