Cómo cocultivar células tumorales y macrófagos
También se han establecido infinitas líneas celulares de macrófagos, la mayoría derivadas de ratón, como P338D1, S774A.1, RAW309Cr.l, etc. Todos son malignos, muestran morfología de macrófagos y función fagocítica en cultivo, y son fáciles de pasar y aislar de la pared de la botella, pero es difícil establecer cepas. Los macrófagos se pueden cultivar mediante una variedad de métodos y fuentes. El método de la cavidad abdominal del ratón es el más práctico. Los detalles son los siguientes:
Tres días antes del experimento, inyecte 1 ml de ácido tioglicólico estéril. caldo en la cavidad abdominal de cada ratón (no inyectado en el intestino).
2. Mata al animal cortándole el cuello, sujeta la cola del ratón y sumerge todo el ratón en alcohol al 70% durante 3 a 5 segundos.
3. Coloque al animal en la mesa de disección, fije las extremidades con agujas, use unas pinzas para abrir la piel y tire de ella hacia ambos lados para exponer el peritoneo, pero sin dañar la pared peritoneal.
4. Después de frotar la pared peritoneal con alcohol al 70%, inyecte 10 ml de líquido en la cavidad abdominal con una jeringa y amase la pared peritoneal por ambos lados con los dedos para permitir que el líquido fluya completamente. en la cavidad abdominal.
5. Utilice la aguja para agitar suavemente la pared abdominal, incline el cuerpo del animal ligeramente hacia un lado y permita que el líquido de la cavidad abdominal se acumule debajo de la aguja e inhale la aguja.
6. Sacar con cuidado la aguja, inyectar el líquido en el tubo de centrífuga, centrifugar a 250g y 4°C durante 10 minutos, retirar el sobrenadante y añadir 10ml de medio Eagle.
7. Cuente las células. Cada ratón puede producir 20~30×105 células, el 90% de las cuales son macrófagos.
8. Para obtener 3×105 células adherentes/cm2 es necesario inocular 2,5×106 células/ml.
9. Para purificar las células cultivadas, retire otros glóbulos blancos. Después de la inoculación durante varias horas, retire el medio de cultivo, lave con solución Eagle 1 a 2 veces, luego agregue nuevo medio de cultivo Eagle y. colocar a 37°C. Cultivar en incubadora de CO2 al 5%.