Cómo utilizar el gen informador GUS para detectar el gen deseado
Cómo utilizar el gen informador GUS para detectar el gen deseado
Los genes marcadores se suelen utilizar para probar el éxito de la transformación de vectores de ADN recombinantes o para detectar la ubicación de genes diana en células o tejidos vegetales. Los genes marcadores de uso común son algunos genes de resistencia a los antibióticos, como los genes de resistencia a la kanamicina, los genes marcadores de higromicina, etc.
Por ejemplo: un determinado gen plásmido de resistencia a la ampicilina (este gen puede considerarse como un gen marcador) se combina con un fragmento de ADN exógeno para formar un plásmido recombinante y se transfiere a la célula receptora ya sea somática. Las células son resistentes a la ampicilina se utiliza para determinar si las células receptoras han adquirido el gen objetivo. Cuando se utiliza un medio selectivo (como un medio que contiene ampicilina) para cultivar células receptoras, se puede considerar que las células receptoras que pueden sobrevivir en el medio han introducido con éxito ADN extraño y el gen marcador funcionará.
Como gen informador, debe cumplir las siguientes condiciones en términos de selección genética y detección de cribado: (1) Ha sido clonado y se ha determinado la secuencia completa (2) El producto de expresión no; existe en las células receptoras, es decir, no hay fondo y no hay un producto de expresión endógeno similar en las células transfectadas (3) Su producto de expresión se puede medir cuantitativamente; Los genes indicadores de uso común actualmente incluyen el gen de la cloranfenicol acetiltransferasa (cat), el gen de la luciferasa (luc), el gen de la β-glucuronidasa (gus), el gen de la fosfatasa alcalina secretada (seap) y el gen de la proteína verde fluorescente (gfp), etc.
Por ejemplo:
Gen de la proteína verde fluorescente (gfp). La proteína verde fluorescente se deriva de las medusas del organismo marino. Su gen puede expresarse en tejidos heterólogos y producir luz. La longitud del marco de lectura abierto de Cdnad es de aproximadamente 740 pb y codifica 238 residuos de aminoácidos. el número interno de su cadena peptídica es Serina-deshidrotirosina-glicina en las posiciones 65-67 forma un gen cromogénico mediante autociclación y oxidación, que emite fluorescencia verde bajo irradiación de luz azul o longitud de onda ultravioleta larga. Las células transfectadas se pueden observar directamente para determinar la expresión genética en microscopía de fluorescencia o citometría de flujo (FACS).