Un método para aislar tejido tumoral de ratón

(1) Obtenga el búfer de aislamiento de la celda BAT.

Añadir p/s a 1:1000 y almacenar a 4°C.

Nota:

Antes de usar, agregue colagenasa (c5138) al tampón de separación en una proporción de 1 ~ 2 mg/ml, filtre la solución de digestión con un filtro e incube a 37 Precalentar en baño maría ℃.

(2) Paso: Primero calentar el medio de cultivo (para cultivo, aislamiento y digestión)

1) Remojar los ratones recién nacidos en etanol al 70% durante aproximadamente 5 minutos para desinfectarlos (después; nacimiento en dos días)

2) Corte la piel en el medio del hombro, use dos pinzas para separar la piel y use unas pinzas para el codo para quitar BAT (el tejido en forma de mariposa entre el hombro cuchillas, tratar de no eliminar otro exceso de tejido) Pasar a un plato de 60 mm que contenga PBS

3) Lavar 2-3 veces con PBS

4) Sacar el murciélago; tejido y cortar en trozos pequeños de 1 mm2 sin líquido.

Colocar el tejido subdividido en 3ml de tampón de separación que contenga colagenasa; digerirlo en un baño de agua a 37°C durante 30 minutos

5) Después de 30 minutos, sacudir vigorosamente el jugo digestivo; para permitir que se adhiera. Las células se dispersan; cuanto más turbio es el líquido, más células se sacuden.

6) Filtrar el jugo digestivo en un tubo de centrífuga de 15ml a través de un tamiz, centrifugar a 200g durante 5 minutos y desechar el sobrenadante.

7) Utilizar tampón de separación (sin colagenasa); Soplar el sedimento en el fondo del tubo de centrífuga, mezclar y centrifugar: 200g, 5 minutos, descartar el sobrenadante

8) Resuspender las células en 5 ml de medio de cultivo FBS-DMEM al 20% y; inocularlos en un plato de cultivo de 60 mm, enjuagar con medio de cultivo antes de cambiar el medio al día siguiente;

Lo he comido muchas veces, y siempre que los ratones nazcan dentro de los 2 días, ahí. ¡No habrá problema~!