Cómo hacer secciones de parafina de bazo de ratón
Has conocido a la persona adecuada. Resulta que estos días estoy haciendo rodajas de epitelio cuboide pseudoestratificado.
De hecho, cortar es fácil de hacer. Lo más importante es que lo sea. cortado por su microtomo ¿Qué tal espesor fino?
Déjame contarte el procedimiento:
1. Recolección y fijación del material:?
Retira los bloques de tejido frescos. cadáveres humanos o animales (generalmente el espesor no excede los 0,5 cm) en un fijador preparado previamente (formalina al 10%, fijador de Bouin, etc.) para desnaturalizar y coagular las proteínas de los tejidos y células para prevenir la autólisis o la autólisis después de la muerte del Descomposición de las células, manteniendo así la estructura morfológica original de las células. ?
2. Deshidratación y transparencia:
Generalmente se utiliza alcohol de baja a alta concentración como agente deshidratante para eliminar gradualmente el agua del bloque de tejido. Luego, el bloque de tejido se coloca en xileno, un agente clarificante que es soluble tanto en alcohol como en parafina, para hacerlo transparente. El alcohol en el bloque de tejido se reemplaza con xileno antes de poder sumergirlo en cera para su inclusión. 3. Incrustación de cera:
Coloque el bloque de tejido transparente en parafina derretida y colóquelo en una caja para disolver cera como aislamiento. Espere hasta que la parafina esté completamente sumergida en el bloque de tejido antes de incrustarla: primero prepare un recipiente (como una pequeña caja de cartón doblada), vierta la parafina derretida y rápidamente recoja el bloque de tejido empapado en parafina y colóquelo en él. . Enfriar y solidificar en bloques. El bloque de tejido incrustado se endurece antes de poder cortarlo en rodajas muy finas en un micrótomo. 4. Rebanar y parchar:?
Fije el bloque de cera incrustado en el microtomo y córtelo en rodajas finas, generalmente de 5 a 8 micras de espesor. Las rodajas cortadas suelen estar arrugadas y deben plancharse en agua caliente, luego colocarse en un portaobjetos de vidrio y secarse en un horno a temperatura constante de 45°C. 5. Tinción desparafinada:?
La tinción HE se usa comúnmente para aumentar la diferencia de color de varias partes de la estructura celular del tejido y facilitar la observación. La hematoxilina (H) es un tinte básico que puede teñir los núcleos celulares y los ribosomas intracelulares de color azul púrpura. Las estructuras teñidas por tintes básicos son basófilas. La eosina (E) es un tinte ácido que puede teñir el citoplasma de rojo o rojo claro. Las estructuras teñidas por el tinte ácido son eosinófilas. Antes de teñir, la parafina de las secciones debe eliminarse con xileno, luego pasarse por alcohol de alta concentración a baja concentración y, finalmente, se puede teñir con agua destilada.
El proceso de tinción HE es:
① Coloque las rodajas que se han remojado en agua destilada en una solución acuosa de hematoxilina durante unos minutos para teñir. ?
② Separa los colores en agua ácida y agua con amoníaco, cada uno durante unos segundos. ?
③Enjuague con agua corriente durante 1 hora y luego agregue agua destilada por un rato. ?
④Deshidratar en alcohol 70% y 90% durante 10 minutos cada uno. ?
⑤ Agregue una solución de tinción con alcohol y eosina para teñir durante 2-3 minutos. 6. Deshidratación y transparencia:?
Las secciones teñidas se deshidratan con alcohol puro y luego se pasan por xileno para hacer las secciones transparentes. 7. Montaje: ?
Colocar goma canadiense sobre las secciones transparentes, cubrirlas con cubreobjetos y montarlas. Después de que la encía esté ligeramente seca, pegue una etiqueta y corte la muestra para su uso
Espero poder ayudarte
De esta manera no me cansaré en vano