Entorno de cultivo de macrófagos
Banco de trabajo de limpieza de instalaciones y equipos comunes: también conocido como banco de trabajo de purificación, flujo lateral, flujo descendente y flujo de salida. Quirófano estéril: generalmente consta de tres partes: vestuario, sala de amortiguación y quirófano. En el quirófano hay mesas de trabajo de purificación, incubadoras de dióxido de carbono, centrífugas y microscopios invertidos. La sala intermedia puede almacenar refrigeradores, congeladores y artículos esterilizados esterilizados. Sala de operaciones: incubadora ordinaria, centrífuga, baño maría, reloj fijo, balanza ordinaria y análisis y procesamiento diario. Sala de lavado y desinfección: horno, recipiente esterilizador, procesador de agua destilada, tanque de ácido. Sala de análisis: microscopio, ordenador, impresora, etc. Placas de Petri
Los recipientes de cultivo celular de uso común incluyen botellas de cultivo, placas de cultivo, placas de cultivo, etc. La cantidad habitual de preparación es tres veces la cantidad utilizada. Los utensilios deben estar hechos de materiales con buena transparencia, no tóxicos y que favorezcan la adhesión y el crecimiento celular. Se utilizan comúnmente productos de poliestireno desechables o productos de vidrio de dureza neutra. Los utensilios de uso común son los siguientes.
(1) Botella de almacenamiento de líquidos: se utiliza para almacenar diversos medios de cultivo preparados, suero y otros líquidos. Las especificaciones más utilizadas son 500 ml, 250 ml y 100 ml.
(2) Frascos de cultivo: Los diferentes frascos de cultivo tienen diferentes formas según los tipos de células cultivadas. Las células utilizadas para el subcultivo celular requieren un espesor de pared del matraz uniforme para facilitar el crecimiento y la observación celular. El tamaño de la boca de la botella debe ser uniforme y el diámetro generalmente no es inferior a 1 cm. Se permite que el tubo se extienda a cualquier parte de la botella; las especificaciones son 200 ml, 100 ml, 50 ml, 25 ml, 65438.
(3) Placa de Petri: utilizada para cultivo abierto y otros fines. Los diámetros son 30 mm, 60 mm, 120 mm, etc.
(4) Pipa: Hay dos tipos de pajitas de uso común: pajitas largas y pajitas cortas. Las pajitas largas también se llaman pajitas graduadas. La parte superior del tubo mejorado tiene una escala esférica llamada pajita mejorada, y la pajita graduada se utiliza para mover líquidos. Los más utilizados son 1 ml y 10 ml. Las pajitas cortas también se denominan goteros y se dividen en cabezas acodadas y rectas.
(5) Tubo de centrífuga: El tubo de centrífuga es el recipiente más utilizado en el cultivo celular. Dependiendo del propósito, existen dos tipos de tubos de centrífuga comúnmente utilizados para el cultivo celular: tubos de centrífuga cónicos con cinturón grande y tubos de centrífuga cónicos comunes. Los primeros son de 50 ml, 30 ml y 15 ml respectivamente; los segundos son en su mayoría de 10 ml y 5 ml.
(6) Otros: como matraz Erlenmeyer, vaso de precipitado, probeta graduada, embudo, jeringa, etc.
Temperatura del cultivo celular
Para mantener un crecimiento vigoroso de las células cultivadas se requiere una temperatura constante y adecuada. Los diferentes tipos de células tienen diferentes requisitos de temperatura de cultivo. La temperatura estándar para el cultivo de células humanas es 36,5 ℃ ± 0,5 ℃. Si la temperatura se desvía de un cierto rango, el metabolismo normal de las células se verá afectado o incluso morirá.
Las células cultivadas son más tolerantes a las bajas temperaturas que a las altas. Cuando la temperatura desciende por debajo de los 39°C, el metabolismo celular es proporcional a la temperatura. Las células humanas pueden dañarse a 39-40°C durante 1 hora, pero la recuperación aún es posible a 40-41°C y 1 hora, las células generalmente están dañadas y es probable que solo la mitad de ellas se recuperen a 41-42; °C durante 1 hora, el daño celular es grave. La mayoría muere, pero las células aún pueden recuperarse. Cuando la temperatura fue superior a 43 °C durante 65438 ± 0 horas, todas las células murieron.
Por el contrario, cuando la temperatura no es inferior a 0 ℃, tiene un impacto en el metabolismo celular, pero no hay daño cuando las células se colocan a 25-35 ℃, las células aún pueden; sobrevive y crece, pero la velocidad disminuye. Después de colocarlo a 4°C durante varias horas, el crecimiento puede continuar después de cultivarlo a 37°C. El metabolismo celular se ralentiza a medida que disminuye la temperatura. Cuando las temperaturas caen por debajo del punto de congelación, las células mueren debido al daño causado por la congelación del citoplasma. Sin embargo, si se añade una cierta cantidad de anticongelante (dimetilsulfóxido o glicerina) al medio de cultivo, se puede almacenar durante mucho tiempo a temperaturas muy bajas, como -80 °C o -196 °C (nitrógeno líquido).
Entorno gaseoso adecuado
El gas es una de las condiciones necesarias para la supervivencia del cultivo de células de mamíferos. Los principales gases necesarios son el oxígeno y el dióxido de carbono. El oxígeno participa en el ciclo de los ácidos tricarboxílicos, produce energía para el crecimiento y la proliferación celular y sintetiza varios componentes necesarios para el crecimiento celular. En cultivo abierto, las células generalmente se colocan en un ambiente de gases mixtos de 95% de aire y 5% de dióxido de carbono. El dióxido de carbono no es sólo un producto metabólico de las células, sino también un componente necesario para el crecimiento y la reproducción celular. Su función principal en el cultivo celular es mantener el valor del pH del medio de cultivo. El valor de pH óptimo para varios tipos de células es 7,2-7,4 y las desviaciones de este rango pueden tener efectos nocivos en el cultivo celular. Sin embargo, las células tienen mayor resistencia a los ácidos que a los álcalis y son más propicias para el crecimiento celular en un ambiente ácido. Sin embargo, algunas células también prefieren crecer en un ambiente alcalino. Por ejemplo, el valor de pH óptimo para los fibroblastos es 7,4-7,6. Cada célula tiene su pH óptimo.