¿El reactivo de transfección de ácido nucleico pequeño tiene una citotoxicidad extremadamente baja?

◎Excelente rendimiento de transfección celular: la tasa positiva de transfección celular alcanza más del 90%, el efecto de eliminación del gen es obvio y la eficiencia de eliminación del gen de laminina A/C de las células A549 alcanza más del 95 %;

Citotoxicidad extremadamente baja: la tasa de muerte de las células transfectadas es inferior al 10%, lo que reduce en gran medida el impacto de la citotoxicidad en los resultados experimentales;

◎Amplio rango de transfección, más adherente. células Todas las cepas pueden lograr resultados de transfección ideales.

Introducción del producto

El reactivo de transfección de ácidos nucleicos pequeños RFect es un nuevo tipo de reactivo de transfección de ácidos nucleicos pequeños desarrollado con éxito por el equipo de I+D de nuestra empresa dirigido por el científico de renombre internacional Dr. Cui Kunyuan en el laboratorio de Seattle en Estados Unidos. RFect se puede utilizar para transfectar ARN y ADN pequeños dentro de 200 pb, como ARNip, ARN antisentido, microARN, etc. Las células transfectadas incluyen la mayoría de las células adherentes, tales como líneas celulares comunes y líneas celulares tumorales. En la actualidad, ya sea en el extranjero o en el país, los componentes principales de los reactivos de transfección son liposomas o polietilenimina (PEI), los cuales son altamente citotóxicos y tienen efectos de transfección deficientes. RFect utiliza nuevos nanomateriales de origen animal con baja toxicidad y excelente rendimiento de transfección. En comparación con otras marcas de reactivos de transfección de ácidos nucleicos pequeños, la tasa positiva de transfección celular de RFect es generalmente superior al 90% y la eficiencia de inhibición de los genes de lamina A/C es superior al 95%. La tasa de transfección positiva es generalmente inferior. 70%, y la eficiencia de inhibición de los genes de lamina A/C es inferior al 75%. La citotoxicidad de RFect es muy baja y la tasa de muerte de las células transfectadas es inferior al 10%, mientras que la tasa de muerte de las células transfectadas de otras marcas de reactivos es generalmente superior al 30%. El suero no tiene ningún efecto sobre el efecto de transfección y no es necesario agregar o reemplazar deliberadamente el medio de cultivo. Hemos solicitado patentes internacionales sobre la síntesis de materiales y la preparación de reactivos de transfección de ácidos nucleicos pequeños RFect y hemos cubierto muchos países y regiones del mundo a través del PCT. Este producto es adecuado para la transfección de líneas celulares y la transfección de células primarias. Seleccione el reactivo de transfección de ácidos nucleicos pequeños RFectPM.

Pasos de operación: Este manual de instrucciones es adecuado para experimentos de transfección en placas de cultivo de 24 pocillos. Para cantidades para otros tamaños de placas, consulte la siguiente tabla, que muestra las cantidades y volúmenes por pocillo.

A. Inoculación celular: Inocular las células un día antes de la transfección, con 500 μl de medio de cultivo por pocillo, de modo que la densidad celular sea del 30-50% durante la transfección.

B. Preparación de la mezcla perfecta de ARNip:

Se diluyeron 1,6 pmol de ARNip con 50 µl de medio libre de suero.

Se diluyen 2,2μl de reactivo con 50μl de medio sin suero. Incubar suavemente durante 5 minutos e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Nota: Asegúrese de completar el paso tres en 25 minutos, no se demore demasiado.

3. Después de incubar durante 5 minutos, incube el diluyente de ARNip con diluyente RFect (volumen total 100 μl) durante 5 minutos. Mezclar suavemente e incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos.

C. Añadir la mezcla a las células cultivadas (cultivo de medio completo):

1. Añadir 100μl de la mezcla al pocillo de cultivo que contiene 0,5ml de células cultivadas. Agite el plato suavemente para mezclar.

Cultivar a 2,37 ℃ durante 18-72 h y detectar el efecto de inhibición genética. Si es necesario, se puede cambiar el medio de cultivo después de 4-6 horas de cultivo celular, pero no es necesario. La duración del tiempo de incubación depende del tipo de célula,

del gen perturbador en sí y del método de análisis. Se pueden establecer diferentes tiempos de incubación para que el experimento determine el tiempo de incubación óptimo.

Optimización de experimentos de transfección: Para mejorar la eficiencia de la transfección, se recomienda optimizar las condiciones de transfección, especialmente para la primera transfección. Por ejemplo: placa de Petri de 24 pocillos, ¿ajuste? Cantidades de ARNip y reactivos. La dosis de ARNip se ajusta entre 0,6 y 30 pmol (concentración final entre 1 y 50 nm) y la dosis del reactivo RFect se ajusta entre 1,0 y 3,0 µl. Los clientes pueden realizar experimentos previos según la dosis convencional. Si los resultados experimentales no son satisfactorios, la cantidad de agente de transfección se puede ajustar y explorar adecuadamente.

Puntos clave de los experimentos de transfección:

lIntente no utilizar antibióticos durante la transfección, de lo contrario provocará un aumento de la muerte celular;

lLa cantidad de ARNip en el Primer experimento Las dosis se establecieron en concentraciones finales de 10 nM, 30 nM, 50 nM y 100 nM, y los experimentos posteriores se revisaron en función de los resultados experimentales.