Anatomía de ratones sacrificados mediante alimentación por sonda
El "aceite de lúpulo" es una preparación tópica producida por la cervecería Shanghai Huaguang y se utiliza para promover la curación de úlceras y quemaduras crónicas. Para examinar la seguridad del "aceite de lúpulo", este artículo pretende observar las reacciones tóxicas y la muerte de ratones después de una administración oral de "aceite de lúpulo", así como las reacciones tóxicas de ratas con piel intacta y dañada después de corta duración. exposición a largo plazo al "aceite de lúpulo".
1 Materiales
1.1 Animales: Ratones Kunming, con un peso de 18 ~ 22 g, mitad machos y mitad ratas SD, con un peso de 170 ~ 230 g, mitad machos y mitad, por el segundo; Proporcionado por el Centro Experimental con Animales de la Universidad Médica Militar.
1.2 Medicamentos: Huaguang Brewery proporciona "lúpulo" y aceite vegetal neutro (disolvente). De acuerdo con los requisitos experimentales, el "lúpulo" se disuelve en aceite vegetal neutro para preparar "aceite de lúpulo" en diferentes concentraciones.
2 Métodos experimentales
2.1 LD50 oral en ratón [1]
Según los resultados de las pruebas preliminares, el peso corporal del ratón está en el rango de 366 ~ 970 mg/kg Divididos en 7 grupos de 10 animales cada uno. ♀5 ratas por grupo), el intervalo de dosificación fue de 0,85 y el volumen de dosificación intragástrica fue de 0,1 ml por 10 g de peso corporal. Se creó un grupo de control de disolventes y sólo se administraron 0,8 ml de aceite vegetal neutro por animal.
Después de un ayuno de 12 horas, a los ratones se les administró una administración intragástrica. Después de la administración, observe las reacciones tóxicas de los animales y registre el número de muertes de manera oportuna. Diseccione inmediatamente los animales muertos y observe los cambios patológicos en los órganos internos. Los animales no muertos fueron observados continuamente durante 9 días, luego sacrificados, disecados y observados cambios en los órganos.
LD 50 se calcula utilizando el método Bliss y se calcula utilizando el "programa NDST" de computadora.
2.2 Prueba de toxicidad aguda en piel de rata [2]
Los animales de experimentación se dividen en dos partes: piel intacta y piel dañada, y cada parte se divide en tres grupos de dosis: grande, mediano y pequeño. El intervalo de dosis fue de 0,7 y había 10 ratas en cada grupo. Se creó un grupo de control de disolventes, con 6 ratas en cada grupo.
Bajo anestesia con ketamina (90 mg/kg ip), se eliminó el pelo de la espalda de la rata (se cortó con cuidado el pelo de la espalda con una navaja) y el rango de depilación fue de aproximadamente 4,5 cm × 7 cm (aproximadamente Tabla 65, 438 00). Aplique uniformemente diferentes concentraciones de "aceite de lúpulo" y disolvente, aproximadamente 0,6 ml/área de depilación, cubra con una película plástica no tóxica y venda. En el grupo con lesiones cutáneas, se hizo una incisión en la epidermis de las ratas con la punta de una aguja en la zona depilada del lomo y luego se aplicó "aceite de lúpulo" en diferentes concentraciones. Después de la administración, se observó la toxicidad sistémica de los animales. Los animales muertos fueron inmediatamente sometidos a autopsias y se observaron a simple vista los cambios patológicos de varios órganos. Las ratas fueron sacrificadas 10 días después y se realizó una disección macroscópica para observar cambios en varios órganos de todo el cuerpo.
3 resultados
3.1 LD 50 oral en ratones.
Después de la administración oral a ratones, los animales muertos desarrollaron síntomas como dificultad para respirar e irritabilidad en aproximadamente 0,5 a 2 horas, seguidos de espasmos en las extremidades y espasmos evidentes antes de la muerte. La muerte generalmente ocurre dentro de 1 a 6 horas después de la administración, y las muertes individuales ocurren dentro de 12 a 48 horas. Una autopsia inmediatamente después de la muerte mostró que el corazón del ratón había dejado de contraerse debido a la rigidez muscular antes de morir. No se encontraron congestión, edema ni cambios orgánicos evidentes en los órganos internos importantes (corazón, pulmones, hígado, bazo, riñones, tracto digestivo, etc.). ). La mayoría de los animales vivos tienen dificultad para respirar, actividad ligeramente menor en 24 horas y disminución del apetito.
Después de 24 horas (48 horas en algunos casos), se reanudaron gradualmente las actividades y la alimentación. El estado general fue bueno y no se produjeron otras reacciones adversas. Los ratones fueron sacrificados después de 9 días de observación continua. No se encontraron cambios patológicos en la anatomía macroscópica. No se encontró ninguna reacción tóxica obvia en los 10 ratones del grupo de control con disolvente después de la administración, y fueron sacrificados después de 10 días de observación. No se encontraron hallazgos anormales en la anatomía macroscópica.
Las tasas de mortalidad de cada grupo de dosis se muestran en la Tabla 1. No existe una diferencia de género obvia en las tasas de mortalidad.
La LD 50 calculada por el método Bliss es 577,06 mg/kg y el rango del límite de confianza 95 es 505,74 ~ 658,43 mg/kg.
3.2 Prueba de toxicidad aguda en piel de rata
La tasa de mortalidad de las ratas en cada grupo de dosis y los cambios en el peso corporal antes y después de la administración se muestran en la Tabla 2.
Tabla 1 Cálculo de la LD 50 tras la administración oral de “aceite de lúpulo” a ratones (método Bliss)
Dosis (mg/kg)
Dosis logarítmica ( x )
Número de animales (solo)
Número de animales muertos (solo)
Tasa de mortalidad ()
Unidad de probabilidad ( y )
Novecientos setenta
2.987
10
10
100
6.75
824
2.916
10
Ocho
80
6,20
701
2,846
10
Siete
70
5,66
p>596
2.775
10
Seis
60
5.11
506
2.704
10
Cuatro
40
4.56
430
2.633
10
2
20
4.01
366
2.563
10
3.46
Tabla 2 Reacciones tóxicas del “aceite de lúpulo” en piel de rata
Grupo
No
Concentración del fármaco ()
Número de animales (únicamente)
Número de animales muertos (únicamente)
p>Peso (gramos, x segundos)
Antes y después de la medicación
Final
Corrección/general
Piel
Piel
A
53.67
10
206 19
210 24
B
37.57
10
207 21
220 20
D
Disolvente
Seis
198 19
206 22
Roto
Daño
Piel
Piel
A
53.67
10
2
200 20
204 23
B
37,57
10
202 18
207 21
C
26,30
10
198 19
199 24
D
Disolvente
VI
206 22
208 20
En piel intacta En ratas, no hubo toxicidad obvia en los dos grupos ni en el grupo de control con solvente, y no hubo cambios obvios en la dieta y la actividad después del tratamiento.
No hubo ninguna reacción de irritación local obvia como enrojecimiento o hinchazón en cada grupo, y el pelo largo comenzó a crecer en el área de depilación después de 1 semana. Las ratas fueron sacrificadas después de 10 días de observación continua. No se encontraron cambios anormales obvios en los órganos en la anatomía macroscópica.
Dos ratas en el grupo de dosis alta murieron entre 4 y 24 horas después de tomar el medicamento, con evidente dificultad para respirar y leves contracciones musculares antes de la muerte. La autopsia no mostró anomalías evidentes después de la muerte. Además, 2 ratas del grupo de dosis alta y 1 rata del grupo de dosis media experimentaron disnea transitoria entre 8 y 12 horas después de tomar el fármaco. No hubo reacciones tóxicas obvias en otros grupos ni en el grupo de control con disolvente, y sólo unos pocos animales tuvieron una pequeña pérdida de apetito el día de la administración. Después de 10 días consecutivos de observación, la dieta y las actividades de las ratas eran normales y sus cambios de peso no eran evidentes. La herida en el área dañada de la piel de la rata comenzó a formar costras al día siguiente, sin enrojecimiento, hinchazón, ulceración o infección evidentes. El tiempo de cicatrización de la herida fue de aproximadamente 65.438 ± 0 semanas, sin cicatrices evidentes. Después de 10 días de observación, comenzó a crecer pelo en las áreas de pérdida de cabello de algunas ratas, y fueron asesinadas después de 10 días. No se encontraron cambios anormales en la anatomía macroscópica.
4 Discusión
El lúpulo es un ingrediente activo extraído del lúpulo y está compuesto principalmente por lúpulo y lúpulo. Los datos de investigaciones existentes muestran que el lúpulo tiene ciertos efectos antibacterianos y promueve la proliferación del tejido de granulación. Los resultados de este experimento muestran que cuando el área del fármaco representa el 10% de la superficie corporal, la piel dañada de las ratas puede tolerar bien el "aceite de lúpulo" con concentraciones de 26,30 y 37,57, y las heridas de la piel dañada sanan rápidamente y están libres de infección. Estas dos concentraciones son 5 veces y 7 veces la concentración del fármaco clínico respectivamente (la concentración del fármaco clínico es 5). La piel intacta también puede tolerar el "aceite de lúpulo" con una concentración 10 veces mayor que la del fármaco clínico, sin ninguna reacción de envenenamiento evidente. El aceite vegetal neutro se utiliza como disolvente y puede utilizarse sobre piel dañada y piel intacta sin reacciones tóxicas obvias. La LD 50 del fármaco tomado por vía oral en ratones es de 577,06 mg/kg, que es una sustancia poco tóxica. Los resultados anteriores sugieren que el "aceite de lúpulo" es seguro en su aplicación clínica.