Desarrollador de Fucoidan
Elegir el desarrollador adecuado es la primera prioridad. Los disolventes de uso común están ordenados de polaridad pequeña a grande: ventilador de aceite
La proporción de agente revelador depende del experimento. Generalmente, según el tipo de agente revelador que se utiliza para este tipo de compuesto reportado en la literatura, primero intente usar este tipo de agente revelador y luego continúe probando la proporción hasta encontrar un agente revelador con buen efecto de separación. Condiciones de selección para el desarrollador: ① Tiene buena solubilidad para los componentes requeridos; ② Puede separar los componentes ③ El Rf del componente a medir está entre 0,2 ~ 0,8 y la medición cuantitativa está entre 0,3 ~ 0,5 (4; ) No ocurre reacción química con el componente a medir o el adsorbente; ⑤ El punto de ebullición es moderado y la viscosidad es baja; ⑥ Después de la expansión, las manchas del componente son redondas y concentradas; ⑦ Es mejor preparar el disolvente mezclado recién.
En términos generales, las dos fases básicas de un sistema disolvente débilmente polar están compuestas de n-hexano y agua, y luego se añaden metanol, etanol y acetato de etilo según sea necesario para ajustar la polaridad del sistema disolvente a lograr una buena separación Efectivo para la separación de alcaloides, flavonoides y terpenoides. El sistema de disolventes de polar medio está compuesto por cloroformo y agua, ajustado con metanol, etanol y acetato de etilo y es adecuado para la separación de antraquinonas, cumarinas, lignanos y terpenoides altamente polares. El disolvente altamente polar compuesto de n-butanol y agua también está regulado por metanol, etanol y acetato de etilo y es adecuado para la separación de alcaloides más polares.
Muchas veces, la elección del revelador depende de cambiar la composición del revelador para conseguir los mejores resultados. En nuestros experimentos, para separar eficazmente un ligando de otras impurezas, probamos varias combinaciones de disolventes y finalmente encontramos un disolvente mixto de éter de petróleo-etoac-HCOOH (5,5: 3,5: 0,1). Generalmente, al mezclar dos disolventes, utilice un disolvente mixto con una relación de volumen de polaridad alta/polaridad baja de 1/3. Si hay signos de separación, ajuste la proporción (o agregue un tercer solvente) para obtener mejores resultados. Si no hay signos de separación (las manchas se "arrastran"), lo mejor es cambiar el disolvente. Para las sustancias que se descomponen fácilmente en el gel de sílice, a menudo se agrega al agente revelador una pequeña cantidad de sustancias alcalinas como trietilamina, amoníaco, piridina, etc. para neutralizar la acidez del gel de sílice. (A la hora de elegir la sustancia alcalina añadida, también hay que tener en cuenta la facilidad de eliminación del producto. El amoníaco es sin duda una mejor opción. El efecto de separación está estrechamente relacionado con la calidad del gel de sílice y el disolvente utilizado: gel de sílice producido por diferentes fabricantes puede tener contenido de agua, tamaño de partículas, etc. Las diferencias en espesor y acidez dan como resultado que el gel de sílice de un fabricante tenga un buen efecto de separación, mientras que el gel de sílice de otro fabricante tenga un efecto de separación deficiente. El disolvente tiene un impacto significativo en el efecto de separación. La temperatura y la humedad también tienen un impacto significativo en el efecto de separación. Encontramos en experimentos que, a veces, bajo las mismas condiciones de expansión, el Rf por la mañana y por la tarde es completamente diferente. >
La elección del agente revelador se basa principalmente en la polaridad, solubilidad y actividad del adsorbente de la muestra.
Al realizar un análisis por cromatografía en capa fina, primero debemos conocer el tipo de sustancia química desconocida. Componentes y su polaridad aproximada A partir de la polaridad de la solución de extracción o de la fase móvil de la columna cromatográfica, podemos conocer la otra muestra. Los distintos componentes químicos del material se dividen aproximadamente según su polaridad y luego se subdividen. separación de sustancias químicas desconocidas, la selección del agente revelador también es un proceso exploratorio que no solo puede considerarse en función del agente revelador, sino que también requiere una combinación de múltiples factores.
Disolvente. La elección del disolvente en la cromatografía tiene un gran impacto en la separación de los componentes. El disolvente (disolvente único o mixto) utilizado en la cromatografía en columna suele denominarse eluyente. A menudo se le llama agente revelador cuando se utiliza en cromatografía en capa o en papel. considerarse en función de la combinación de sustancias a separar y de las propiedades del adsorbente elegido.
Cuando la sustancia separada es una sustancia débilmente polar, normalmente se selecciona como eluyente un disolvente débilmente polar. Si la sustancia separada es un componente altamente polar, se debe seleccionar un disolvente polar como eluyente. Si se utiliza un adsorbente débilmente adsorbente para sustancias polares (como tierra de diatomeas o talco en lugar de gel de sílice), también se debe reducir correspondientemente la polaridad del eluyente.
En la operación de capa de columna, la muestra separada se puede agregar mediante este método, o se puede seleccionar un solvente adecuado para disolver la muestra y luego agregar. El disolvente utilizado para disolver la muestra debe ser de baja polaridad para que los componentes separados puedan adsorberse. Luego aumente gradualmente la polaridad del disolvente. Este aumento de polaridad es un proceso muy lento llamado "elución en gradiente", mediante el cual los componentes adsorbidos en la columna se eluyen uno por uno. Si la polaridad aumenta demasiado (el gradiente es demasiado grande), no se puede obtener una separación satisfactoria. La capacidad de elución de un disolvente a veces puede expresarse mediante la constante dieléctrica (ε) del disolvente. Cuanto mayor sea la constante dieléctrica, mayor será la capacidad de elución. La secuencia de elución anterior sólo se aplica a adsorbentes polares como gel de sílice y alúmina. Para los adsorbentes no polares, como el carbón activado, el orden es exactamente el contrario, siendo la adsorción formada en agua o disolventes hidrófilos más fuerte que en los disolventes liposolubles.
3. Propiedades de la sustancia separada: La sustancia separada, el adsorbente y el eluyente constituyen los tres elementos en la cromatografía de adsorción, y están estrechamente relacionados. Bajo condiciones específicas de adsorbente y eluyente, la separación de cada componente está directamente relacionada con la estructura y propiedades de las sustancias separadas. En el caso de los adsorbentes polares, los componentes son altamente polares y tienen fuertes propiedades de adsorción.
Por supuesto, la visión molecular general de los ingredientes de las hierbas medicinales chinas es importante. Por ejemplo, cuantos más grupos polares, mayor será la energía de adsorción y cuantos menos átomos de carbono haya en el homólogo, más fuerte será la adsorción. En resumen, mientras existan diferencias estructurales entre los dos componentes, la separación es posible y la clave está en la elección de las condiciones. Debe considerarse en función de la relación entre la naturaleza de la sustancia a separar, la fuerza de adsorción del adsorbente y la naturaleza del disolvente. Primero considere la polaridad de la sustancia que se está separando. Si la sustancia a separar tiene muy poca polaridad, es un terpeno sin oxígeno o contiene oxígeno pero grupos no polares, es necesario elegir un adsorbente con fuerte capacidad de adsorción y eluir con un disolvente débilmente polar como éter de petróleo o benceno. . La mayoría de los ingredientes de la medicina tradicional china son muy polares, por lo que es necesario elegir un adsorbente con un rendimiento de adsorción débil (generalmente de grado III a IV). La polaridad del eluyente utilizado debe determinarse de acuerdo con un cierto gradiente de pequeño a grande, o se debe utilizar cromatografía en capa fina para determinar la separación de la sustancia separada en el sistema disolvente. Además, la posibilidad de obtener una separación satisfactoria también está estrechamente relacionada con la elección del gradiente de disolvente. Se proporciona un ejemplo para ilustrar la relación entre el adsorbente, el eluyente y la polaridad de la muestra en la cromatografía de adsorción. En el caso de mezclas de varios componentes, como por ejemplo aceites y grasas vegetales, se compone de alcanos, alquenos, ésteres de alcohol, triacetina y ácidos grasos. Cuando se utiliza gel de sílice como adsorbente, se selecciona una serie de disolventes mixtos para eluir el aceite adsorbido. Cada componente del aceite se puede eluir en secuencia según su polaridad.
Para otro ejemplo, las saponinas esteroides C-27 se pueden separar según el número de grupos hidroxilo en las palabras: disolver las saponinas mixtas en benceno que contenga 5 cloroformo, agregar una columna de adsorción de alúmina y usar lo siguiente gradiente de disolvente para eluir. Si se usa silicato de magnesio con adsorción débil en lugar de alúmina, la polaridad del eluyente debe reducirse en consecuencia debido a la adsorción débil del silicato de magnesio. Es decir, se puede usar benceno o benceno que contiene 5-cloroformo para eluir monohidroxi saponinas del adsorbente. . Este ejemplo ilustra que cuando los mismos componentes de la medicina herbaria china se separan cromatográficamente en diferentes adsorbentes, se requieren diferentes disolventes para lograr el mismo efecto de separación, ilustrando así la relación entre el adsorbente, el disolvente y los componentes que se van a separar.
(2) Cromatografía en capa fina: La cromatografía en capa fina es un método de cromatografía de microvolúmenes sencillo, rápido y. Generalmente, el adsorbente para cromatografía en columna se extiende sobre una superficie plana, como una lámina de vidrio, para formar una capa delgada, lo que se denomina cromatografía en capa fina. Su principio es básicamente similar al de la cromatografía en columna.
1. Características de la cromatografía en capa fina: Comparación de la aplicación y funcionamiento de la cromatografía en capa fina y la cromatografía en columna.
2. Selección de adsorbentes: Los principios para seleccionar adsorbentes para cromatografía en capa fina son los mismos que para la cromatografía en columna. La principal diferencia es que la TLC requiere que el tamaño de partícula del adsorbente (apuntalante) sea más fino, generalmente menos de 250 mallas, y el tamaño de partícula debe ser uniforme. Generalmente, la actividad del adsorbente o de la capa fina prefabricada utilizada en la cromatografía de capa fina no debe ser demasiado alta, siendo los niveles II a III los adecuados. La distancia de difusión depende del tamaño de partícula de la capa delgada. Cuanto más fino sea el tamaño de partícula de la capa delgada, más corta será la distancia de expansión, generalmente menos de 10 cm; de lo contrario, puede causar difusión cromatográfica y afectar el efecto de separación.
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3. Selección del agente revelador: TLC, cuando la actividad del adsorbente alcanza un cierto valor (como el nivel II o el nivel III), la separación satisfactoria de las muestras multicomponente depende de la selección. de agente revelador. Entre los componentes liposolubles, los componentes químicos de las hierbas medicinales chinas se pueden dividir aproximadamente en no polares, débilmente polares, mediopolares y fuertemente polares según su polaridad. Sin embargo, en el trabajo real, a menudo es necesario utilizar la polaridad del disolvente para ajustar la polaridad del revelador.