Preparación de medio de peptona de extracto de carne
Extracto de vacuno 3g
Peptona 10g
Cloruro de sodio 5g
Agar 15- 20g
1000 ml de agua
pH 7,4-7,6
Tercero, equipo
Pasta de carne, peptona, cloruro de sodio, agar;
1 mol/L de hidróxido de sodio, 1 mol/L de ácido clorhídrico
Tubos de ensayo, matraces Erlenmeyer, vasos de precipitados, probetas medidoras, varillas de vidrio, dispensadores de medio de cultivo, escalas de torsión, cuernos; Cuchara, autoclave, papel test de pH (pH 5,5-9,0), algodón, papel kraft, rotulador, cuerda de cáñamo, gasa, etc.
IV.Pasos de la operación
1. Pesar
Pesar con precisión el extracto de carne, la peptona y el NaCl según la proporción de la fórmula del medio y colocarlos en un vaso de precipitados. . La salsa de carne generalmente se prepara tomando una varilla de vidrio, pesándola en un vaso pequeño o en un cristal de reloj, derritiéndola con agua caliente y vertiéndola en el vaso. También puedes colocarlo sobre papel de pesar y ponerlo directamente en el agua después de pesarlo. En este momento, caliéntalo un poco y la salsa de carne se separará del papel de pesar, y luego retira el papel inmediatamente. La peptona absorbe fácilmente la humedad y debe pesarse rápidamente. Además, al pesar los medicamentos, tenga cuidado de no mezclarlos. Utilice una cuchara de cuerno para un tipo de medicamento, o después de pesar un tipo de medicamento, lávela y séquela antes de pesar otro medicamento. No le pongas la tapa equivocada a la botella.
Derretir
En un vaso de precipitado, primero puedes añadir menos agua de la necesaria, removerla con una varilla de vidrio y luego calentarla sobre una malla de amianto para disolverla. Una vez que el medicamento esté completamente disuelto, agregue agua hasta alcanzar el volumen total requerido. Si prepara un medio sólido, agregue una cantidad pesada de agar al fármaco disuelto y caliéntelo para derretirlo. Durante el proceso de fusión del agar, se requiere agitación constante para evitar que el vaso de precipitados se rompa en el fondo de la pasta de agar. Finalmente, recupere el agua perdida.
Ajustar el valor de pH
Antes de ajustar el valor de pH, utilice papel de prueba de pH de precisión para medir el valor de pH original del medio de cultivo. Si el pH es ácido, use un gotero para agregar 1 mol/L de NaOH al medio de cultivo gota a gota, revolviendo mientras agrega, y pruebe el valor de pH con papel de prueba de pH en cualquier momento hasta que el pH alcance 7,6. De lo contrario, utilice 1 mol/L de HCl para realizar el ajuste. Tenga cuidado de no ajustar demasiado el pH, de lo contrario afectará la concentración de iones en el medio de cultivo.
Para algunos microorganismos que requieren un valor de pH más preciso, se puede utilizar un acidómetro para ajustar el valor de pH (consulte las instrucciones de uso correspondientes).
Filtro
Filtrar con papel de filtro o gasa multicapa en caliente para facilitar la observación de los resultados. Si no hay requisitos especiales, este paso generalmente se puede omitir (no se requiere filtrado en este experimento).
Paso 5: Reenvasado
Según los requisitos experimentales, el medio de cultivo preparado se puede dividir en tubos de ensayo o matraces Erlenmeyer. El equipo del subpaquete se muestra en la Figura V-1.
Tenga cuidado de no tocar la boquilla o el medio de cultivo en la boca del frasco durante el proceso de dispensación para evitar contaminar el tapón de algodón y provocar contaminación.
(1) La altura adecuada del envase de líquido es aproximadamente 1/4 de la altura del tubo de ensayo.
(2) Divida el sólido en tubos de ensayo separados y el volumen de carga no deberá exceder 1/5 de la altura del tubo. Esterilice los tubos de ensayo y forme pendientes, como se muestra en la Figura V-2. . El volumen del matraz no debe exceder la mitad del volumen del matraz.
(3) Generalmente, la altura de los tubos de ensayo de envases semisólidos debe ser de 1/3 y colocarse verticalmente después de la esterilización.
6. Tapón
Después de volver a empaquetar el medio, coloque un tapón de algodón en la boca del tubo de ensayo o matraz para evitar que microorganismos externos entren al medio de cultivo y causen contaminación, y para asegurar una buena ventilación (el método de fabricación de tampones se adjunta al final de este experimento).
Envoltorio
Después de tapar, ate todos los tubos de ensayo con una cuerda de cáñamo y luego envuelva una capa de papel kraft alrededor del tapón de algodón para evitar que el agua de condensación moje el tapón de algodón durante la esterilización. y luego atar con cordel. Marque los medios con un marcador con el nombre, grupo y fecha. Después de tapar el matraz Erlenmeyer, se envuelve en papel kraft y se ata con una cuerda de cáñamo en forma de nudo corredizo, que se puede desatar fácilmente durante el uso. Del mismo modo, el nombre, grupo y fecha del medio se indican mediante marcadores.
Desinfección
El medio de cultivo anterior se esteriliza en autoclave a 1,05 kg/cm2 (15 lb/in2) y 121,3 ℃ durante 20 minutos. Si no se puede desinfectar a tiempo debido a circunstancias especiales, se debe guardar temporalmente en el frigorífico.
9. Dejar un bisel.
Enfriar el medio de cultivo del tubo de ensayo esterilizado a unos 50°C, colocar el extremo del tapón de algodón del tubo de ensayo sobre la varilla de vidrio y la longitud de el bisel no debe exceder la mitad del largo total del tubo de ensayo.
10. Inspección de esterilidad
Colocar el medio de cultivo esterilizado en un invernadero a 37°C durante 24-48 horas para comprobar si la esterilización está completa.
Adjunto: Fabricación de Tampones
Los tampones tienen dos funciones: una es prevenir la contaminación bacteriana y la otra es asegurar una buena ventilación. Por tanto, la calidad de los tampones tiene un gran impacto en los resultados experimentales. El tampón correcto debe tener una forma, tamaño y estanqueidad que se ajuste completamente a la boca del tubo de ensayo (o a la boca de una botella triangular). Si está demasiado apretado, dificultará la circulación del aire y hará que el funcionamiento sea incómodo. Si está demasiado suelto, no se logrará el propósito de filtrar las bacterias. Cuando está obstruido, 1/3 de la longitud de la astilla debe quedar fuera de la abertura del tubo de ensayo y 2/3 deben estar dentro de la abertura del tubo de ensayo, como se muestra en la Figura V-3. El proceso de fabricación de tampones se muestra en la Figura V-4.
Además, los tapones de ventilación se utilizan a menudo en experimentos microbiológicos e investigaciones científicas. El llamado tapón respirable está hecho de varias capas de gasa (generalmente 8 capas) superpuestas, o se extiende uniformemente una capa de algodón entre dos capas de gasa. Este tapón de ventilación generalmente se agrega a la boca de un matraz Erlenmeyer que contiene medio de cultivo líquido. Después de la inoculación, colóquelo en un agitador para agitar el cultivo para obtener una buena ventilación y promover el crecimiento bacteriano o la fermentación. La forma del tapón de escape