Experimentos biológicos-experimentos de toxicidad

(1) Una descripción general del nuevo medicamento o nueva preparación, que debe pasar por este paso antes de su uso clínico. Aunque los efectos de los fármacos en humanos no pueden demostrarse completamente en animales, estos siguen siendo datos de referencia muy útiles para un nuevo fármaco. Por lo tanto, para garantizar la seguridad de los pacientes, los nuevos medicamentos deben someterse a pruebas de toxicidad antes de su uso clínico. El tipo de prueba de toxicidad se puede elegir según la naturaleza del fármaco y la forma, el método y el momento de uso. Si hay algún medicamento, se producirán síntomas de intoxicación; algunos medicamentos deberán tomarse durante mucho tiempo para que sean efectivos. Por lo tanto, las pruebas de toxicidad del fármaco deben determinarse en función de las características del fármaco.

(2) Prueba de toxicidad aguda (prueba de seguridad general): a 5 ratones sanos que pesan entre 18 y 22 g se les inyecta una cierta dosis de solución medicinal (el volumen apropiado es 0,5 ml) a través de la vena de la cola (o cavidad abdominal). ). (se puede inyectar con agua fisiológica diluida en diferentes concentraciones), el tiempo de inyección es de 4 a 5 segundos y se observa si hay reacciones adversas (como convulsiones, cuadriplejía, marcha inestable, pelos de punta, etc.). El indicador principal es la muerte y no debe ocurrir ninguna muerte dentro de las 48 horas posteriores a la inyección. Si hay muerte, se deben agregar 10 ratones más para volver a realizar la prueba, y ningún ratón debe morir dentro de las 48 horas (los ratones que han realizado este experimento no deben reutilizarse).

Nota (1) Cuando es difícil inyectar el producto de prueba en la vena, se puede inyectar por vía intraperitoneal, el volumen de inyección sigue siendo de 0,5 ml, el tiempo de inyección no está limitado y la muerte no puede ocurrir dentro de las 72 horas posteriores. inyección.

② Si ​​no existe una dosis de prueba segura para un fármaco, la dosis utilizada clínicamente puede multiplicarse por un determinado factor de seguridad y luego convertirse en una dosis basada en el peso corporal del ratón. El factor de seguridad debe determinarse en función de la pureza del fármaco y de los ensayos clínicos. Los medicamentos de tratamiento general se pueden establecer en 50-100, y los medicamentos que deben tomarse durante un período prolongado pueden estar por encima de 100.

Ejemplo: se inyecta a un adulto (basado en un peso corporal de 50 kg), cada volumen de inyección es de 4 ml, el factor de seguridad es 50, la dosis para ratones (basada en 20 g) es:

Dosis de ratón = 4 × 50/50000 × 20 = 0,08 ml

Tome 0,08 ml de este producto, agregue 0,9 inyección de cloruro y dilúyalo a 0,5 ml, como dosis de inyección del producto de prueba.

③ También puedes utilizar el mismo método para realizar la prueba (es decir, inyectar una determinada dosis a los ratones. Si solo muere 1 de los 5 ratones, reduce la dosis y vuelve a intentarlo hasta que 5 ratones mueran). No se ha encontrado ninguna dosis letal). Descubra qué tan seguro es un medicamento.

Fórmula de cálculo:

Factor de seguridad = tolerancia del ratón × peso corporal del adulto (g)/dosis para adulto × peso corporal del ratón (g).

Ejemplo: La dosis de un fármaco es de 4 ml. Cuando la dosis es de 0,2 ml (diluida a 0,5 ml), la inyección intravenosa en ratones provocará la muerte. Reduzca la dosis y vuelva a intentarlo. No hubo respuesta cuando la dosis fue de 0,16ml/20g. Por lo tanto, las soluciones inyectables que contienen alcohol bencílico interferirán con la prueba y se deben tomar nota.

(4) El alcohol bencílico tiene ciertos efectos tóxicos en ratones. Las inyecciones que contienen benzoilo a menudo interfieren con los resultados de las pruebas, por lo que se debe prestar atención.

(3) Pruebas de toxicidad subaguda y crónica Si es necesario utilizar el producto durante un tiempo prolongado, se deben realizar pruebas de toxicidad subaguda o crónica. El método es básicamente el mismo que el de la prueba de toxicidad aguda. Dependiendo del peso del ratón, la dosis de inyección oral o intraperitoneal es de 20 a 50 veces la dosis humana y el fármaco se administra de forma continua durante 1 a 8 semanas. Toxicidad crónica, uso continuo durante 3-6 meses. Durante el período de medicación, se deben observar cuidadosamente los cambios en el peso de los animales de experimentación, la ingesta de alimentos y el consumo de agua para ver si hay reacciones adversas o muerte. Antes y después del experimento, se deben comprobar el hemograma, el hígado, los riñones y otras funciones del animal como referencia. Los animales que murieron durante el experimento o que completaron el experimento deben diseccionarse y observarse sus órganos internos, tuberías y secciones de tejido. Según los resultados de las pruebas, podemos juzgar si se puede utilizar clínicamente.

Nota ① Se deben controlar las pruebas de toxicidad subaguda y crónica. Esto se debe a que el entorno alimentario y el estado de salud de diferentes individuos a menudo varían mucho y, a menudo, es difícil juzgar los cambios en los órganos internos después de la administración sin un grupo de control en blanco para comparar.

②En el caso de los medicamentos no orales, cabe destacar que deben esterilizarse antes de su uso para evitar que los animales se contaminen y afecten los resultados.

③La vía de administración de la prueba de toxicidad debe ser la misma que la de la aplicación clínica. La toxicidad a menudo varía mucho según la vía de administración.

Por ejemplo, la LD50 de la administración oral es decenas de veces mayor que la de la inyección intravenosa o intraperitoneal.

④ Antes de realizar un experimento de toxicidad, se debe considerar cuidadosamente el diseño experimental y se debe hacer todo lo posible para evitar cambios temporales en las condiciones del experimento. Los animales utilizados en los experimentos generalmente deben mantenerse en nuestro laboratorio durante más de 2 semanas y los experimentos se realizarán después de que los animales se adapten al medio ambiente.

⑤ Los laboratorios deben prestar atención a fortalecer el manejo de los animales y mantenerlos limpios e higiénicos. Los animales que murieron durante el experimento deben analizarse objetivamente para llegar a una conclusión correcta.

⑥En los experimentos de toxicidad, además de registrar indicadores de medición, también se debe registrar el estado general del animal, como excitación, inhibición, parálisis, respiración, apetito, peso, etc. Se debe realizar una observación cuidadosa y se deben observar de cerca y registrar en detalle el tiempo, la velocidad y las características de los efectos tóxicos y secundarios del fármaco en el experimento para un análisis completo.

⑦ En experimentos de toxicidad subaguda y crónica, de acuerdo con las diferentes propiedades del fármaco y los requisitos experimentales, los órganos principales de los animales de experimentación propensos a reacciones tóxicas deben verificarse antes y después de la administración y durante el experimento. Los elementos del examen incluyen:

Hemograma: incluye hemoglobina, glóbulos rojos, glóbulos blancos y recuento diferencial.

b Función hepática: el hígado es un importante órgano metabólico del cuerpo. No solo desempeña un papel importante en el metabolismo del azúcar, las proteínas y los lípidos, sino que también es el lugar de desintoxicación de muchos fármacos. el cuerpo, por lo que se debe controlar la función hepática.

c Función renal: la mayoría de los medicamentos se excretan por los riñones, por lo que es necesario determinar si los medicamentos dañan la función renal y el alcance del daño, incluido el contenido de nitrógeno no proteico en la sangre y análisis de orina de rutina.

d Secciones de tejido: puede comprender mejor si el medicamento daña varios órganos y el alcance del daño. Los animales pueden ser sacrificados en lotes en diferentes momentos, incluidos sus corazones, hígados, bazos, pulmones, riñones, estómagos, intestinos, etc. Se puede cortar y comparar con el grupo de control para observar si el fármaco tiene daños irreversibles o irreversibles en varios tejidos.