Preparación y uso del medio de peptona de extracto de carne

La fórmula del extracto de vacuno medio peptona es la siguiente:

Extracto de vacuno 3g

Peptona 10g

NaCl 5g

Agar 15-20g

Agua 1000ml

pH 7,4-7,6

3. Equipo

Extracto de ternera, peptona, NaCl. , agar;

1 mol/L NaOH, 1 mol/L HCl;

Tubos de ensayo, matraces Erlenmeyer, vasos de precipitados, probetas medidoras, varillas de vidrio, dispensadores de medio de cultivo, balanzas de torsión, cuchara de cuerno , esterilizador de vapor de alta presión, papel de prueba de pH (pH 5,5-9,0), algodón, papel kraft, marcador, cuerda de cáñamo, gasa, etc.

4. Pasos de la operación

1. Pesaje

Pesar con precisión el extracto de carne, la peptona y el NaCl en un vaso de precipitados según la proporción de la fórmula del medio de cultivo. La pasta de carne generalmente se recoge con una varilla de vidrio, se pesa en un vaso pequeño o de reloj, se disuelve en agua caliente y se vierte en el vaso. También puedes ponerlo en el papel de pesar y ponerlo directamente en el agua después de pesarlo. Si lo calientas un poco, la pasta de carne se separará del papel de pesar y luego sacará el papel inmediatamente. La peptona absorbe la humedad fácilmente, por lo que es necesario actuar rápidamente al pesar. Además, al pesar medicamentos, tenga cuidado de no mezclarlos. Utilice una cuchara de cuerno para un tipo de medicamento, o después de pesar un tipo de medicamento, lávelo y séquelo antes de pesar otro medicamento.

2. Disolver

En el vaso de precipitados mencionado anteriormente, primero puedes agregar menos cantidad de agua de la requerida, revolverla uniformemente con una varilla de vidrio y luego calentarla sobre la malla de amianto para disolverla. Después de que el medicamento se haya disuelto por completo, agregue agua hasta el volumen total requerido. Si está preparando un medio de cultivo sólido, coloque el agar pesado en el medicamento disuelto y caliéntelo para que se derrita. Durante el proceso de fusión del agar, debe revolver continuamente para evitar que el fondo de la pasta de agar rompa el vaso. Finalmente reponer el agua perdida.

3. Ajustar el pH

Antes de ajustar el pH, primero use papel de prueba de pH de precisión para medir el valor de pH original del medio de cultivo. Si el pH es demasiado ácido, use un gotero para agregar 1 mol/L de NaOH gota a gota. medio de cultivo mientras se agrega Mientras se agita, verifique el valor de pH con papel de prueba de pH en cualquier momento hasta que el pH alcance 7,6. De lo contrario, utilice 1 mol/L de HCl para realizar el ajuste. Tenga cuidado de no ajustar demasiado el valor del pH para evitar una corrección, de lo contrario afectará la concentración de cada ion en el medio de cultivo.

Para algunos microorganismos que requieren un valor de pH más preciso, el pH se puede ajustar con un acidómetro (para su uso, consulte las instrucciones correspondientes).

4． Filtración

Filtrar con papel de filtro o varias capas de gasa en caliente para facilitar la observación de los resultados. Generalmente, este paso se puede omitir si no hay requisitos especiales (no se requiere filtración en este experimento).

5． Dispensación

De acuerdo con los requisitos experimentales, el medio de cultivo preparado se puede distribuir en alícuotas en tubos de ensayo o matraces Erlenmeyer. El dispositivo dispensador se muestra en la Figura V-1.

Durante el proceso de dosificación, tener cuidado de no dejar que el medio de cultivo entre en contacto con la boca del tubo o frasco para evitar contaminar el tapón de algodón y provocar contaminación.

(1) La altura adecuada para dispensar líquido es aproximadamente 1/4 de la altura del tubo de ensayo.

(2) El sólido se divide en tubos de ensayo, el volumen de llenado no excede 1/5 de la altura del tubo y se forma una pendiente después de la esterilización, como se muestra en la Figura V-2. La cantidad de alícuotas en el matraz Erlenmeyer no debe exceder la mitad del volumen del matraz Erlenmeyer.

(3) Los tubos de ensayo dispensadores semisólidos generalmente son adecuados para 1/3 de la altura del tubo de ensayo y deben dejarse verticales para que se condensen después de la esterilización.

6． Tapón

Después de empacar el medio de cultivo, coloque un tapón de algodón en la boca del tubo de ensayo o en la boca del matraz Erlenmeyer para evitar que microorganismos externos entren en el medio de cultivo y causen contaminación, y para garantizar una buena rendimiento de ventilación (hecho de tapones de algodón. El método se adjunta al final de este experimento).

7. Vendaje

Después de tapar, ate todos los tubos de ensayo con una cuerda de cáñamo, luego envuelva el tapón de algodón con una capa de papel kraft para evitar que el agua condensada humedezca el tapón de algodón durante la esterilización y átelo con una cuerda de cáñamo. . Utilice un marcador para indicar el nombre del medio de cultivo, el grupo y la fecha. Después de tapar el matraz Erlenmeyer, envuélvalo con papel kraft y átelo con un nudo corredizo con cuerda de cáñamo. Puede desatarse fácilmente durante el uso. También use un marcador para indicar el nombre, grupo y fecha del medio de cultivo.

8． Esterilización

Esterilice el medio anterior con vapor a alta presión a 1,05 kg/cm2 (15 lbs/in2), 121,3 ℃, durante 20 minutos. Si no se puede esterilizar a tiempo debido a circunstancias especiales, se debe guardar temporalmente en el frigorífico.

9． Deje la pendiente en espera

Enfríe el medio de cultivo del tubo de ensayo esterilizado a aproximadamente 50 °C y coloque el extremo del tapón de algodón del tubo de ensayo en la varilla de vidrio. La longitud de la pendiente no debe exceder la mitad de la pendiente. longitud total del tubo de ensayo.

10. Comprobación de esterilidad

Coloque el medio de cultivo esterilizado en un invernadero a 37°C durante 24-48 horas para comprobar si la esterilización está completa.

Adjunto: Fabricación de tampones

Los tampones tienen dos funciones: una es prevenir la contaminación bacteriana y la otra es asegurar una buena ventilación. Por tanto, la calidad de los tampones tiene un gran impacto en los resultados del experimento. El tampón correcto debe tener una forma, tamaño y ajuste que se ajuste perfectamente a la boca del tubo de ensayo (o a la boca de un matraz Erlenmeyer; si está demasiado apretado, dificultará la circulación del aire y hará que su operación sea incómoda; demasiado suelto, no logrará el propósito de filtrar las bacterias. Al agregar el tapón, 1/3 de la longitud del tapón de algodón debe quedar fuera de la boca del tubo de ensayo y 2/3 deben estar dentro de la boca del tubo de ensayo, como se muestra en la Figura V-3. El proceso de fabricación de tampones se muestra en la Figura V-4.

Además, los tapones de ventilación se utilizan a menudo en experimentos microbiológicos e investigaciones científicas. El llamado tapón de ventilación está hecho de varias capas de gasa (normalmente 8 capas) superpuestas entre sí, o de una capa de algodón distribuida uniformemente entre dos capas de gasa. Este tapón de ventilación generalmente se agrega a la boca de un matraz Erlenmeyer que contiene medio de cultivo líquido. Después de la inoculación, colóquelo sobre una mesa agitadora para agitar el cultivo para obtener una buena ventilación y promover el crecimiento o la fermentación de las bacterias. La forma del tapón de ventilación