Discusión sobre la detección de E. coli en agua potable
Los coliformes totales pueden Proviene de los intestinos de los seres humanos y de los animales de sangre caliente y del entorno natural, incluido un gran grupo de bacterias Gram negativas que pueden fermentar la lactosa, producir ácido y gas, y son aeróbicas y anaeróbicas facultativas a 37°C durante 24 horas. Están presentes en placas de eosina-melan. Las características de crecimiento son: (1) color púrpura intenso con brillo metálico; (2) negro púrpura con brillo metálico nulo o leve (3) colonia de lavanda
Resistente al calor. Los coliformes también se denominan heces. Los coliformes, que incluyen principalmente a Escherichia y la termotolerante Klebsiella [6], son un grupo de coliformes que pueden crecer a 44,5 °C al aumentar la temperatura, y Escherichia coli por naturaleza no puede tolerar el crecimiento por calor [8-9].
Escherichia coli, anteriormente conocida como Escherichia coli, está ampliamente distribuida en los intestinos de humanos y animales de sangre caliente. La flora dominante de bacterias aeróbicas es necesaria para mantener algunas funciones fisiológicas del huésped. . coli no son patógenos, pueden causar infecciones extraintestinales cuando la inmunidad del huésped se debilita o las bacterias invaden tejidos u órganos intestinales externos. Algunos serotipos pueden producir toxinas y causar diarrea en humanos. se ha convertido en uno de los patógenos importantes de las enfermedades intestinales [2]
¿La relación lógica entre sus ámbitos subordinados es la siguiente
? Las "Normas sanitarias para el agua potable" (edición de 2006) ha agregado pruebas de E. coli en el agua potable.
Para mejorar la capacidad de las pruebas de laboratorio, recientemente, nuestro laboratorio ha llevado a cabo actividades de control de calidad para las pruebas de coliformes del agua potable. siguientes objetivos:
1. Utilizando tres tipos de bacterias aisladas durante el trabajo, a saber, coliformes resistentes al calor, cepa estándar Enterobacter aerogenes y cepa estándar Escherichia coli, observar la fluorescencia de diferentes coliformes en el medio de cultivo EC-MUG. y obtener el efecto visual de fluorescencia de las muestras positivas.
El segundo es remojar el tubo de ensayo con ácido y agua destilada, procesarlo y lavarlo directamente con agua del grifo para descubrir los factores que influyen en el efecto de fluorescencia de E. coli.
En tercer lugar, compare los reactivos utilizados en el medio de cultivo Beijing Luqiao EC-MUG y el medio de cultivo Qingdao Haibo EC-MUG para evaluar en el laboratorio.
1 Materiales. e instrumentos
1.1 Medio EC-MUG, adquirido de Beijing Luqiao Co., Ltd. y Qingdao Haibo
1.2 El medio de cultivo Eosin Meilan se adquirió de Beijing Luqiao Co., Ltd.
1.3 caldo nutritivo se adquirió de Beijing Luqiao Co., Ltd.
1.4 incubadora, 36 °C 1 °C; 44,5 0,5 ℃ lámpara ultravioleta con una longitud de onda de 366 nm<; /p>
2 Métodos y resultados
2.1 Principio del método
E. coli puede producir específicamente la enzima ácido β-glucurónico, esta enzima puede descomponer el fluorescente EC-MUG. sustrato en el medio de cultivo para liberar productos de fluorescencia, lo que hace que el medio de cultivo produzca una fluorescencia característica bajo luz ultravioleta de 366 nm. Esta tecnología se puede utilizar para detectar E. coli.
2.2 Pasos de la operación y resultados
La imagen de arriba muestra Enterobacter aerogenes y Escherichia coli cultivadas en medio EC-MUG a 44,5°C. Bajo el fondo de las lámparas fluorescentes, el líquido de Enterobacter aerogenes es transparente, lo que indica que Enterobacter aerogenes no puede crecer ni reproducirse a 44,5°C. La turbidez del líquido de E. coli muestra que E. coli puede crecer y reproducirse a 44,5°C.
Bajo el fondo de observación con luz fluorescente, utilice luz ultravioleta de 366 nm para observar el medio EC-MUG cultivado. Enterobacter aerogenes sigue siendo claro en ausencia de luz azul; los líquidos de la bacteria E. coli con diferentes diluciones tienen una luz azul obvia y no hay una diferencia obvia entre las luces azules. Por lo tanto, al observar el efecto de fermentación de E. coli, puede utilizar una lámpara ultravioleta de 366 nm para observar bajo luz normal y los resultados serán significativos.
La imagen de arriba muestra el efecto experimental del medio de cultivo EC-MUG mencionado anteriormente en una habitación oscura. Escherichia coli produce fluorescencia después de la fermentación y no existe una diferencia significativa en los líquidos bacterianos con diferentes diluciones. Existe una diferencia muy clara entre los efectos negativos y Enterobacter aerogenes. La fluorescencia del tubo de cultivo de Enterobacter aerogenes es débil, lo que puede deberse al hecho de que el propio medio EC-MUG es fluorescente.
Esta imagen es una comparación de los efectos del agua destilada estéril y el medio de cultivo EC-MUG.
Los tubos de ensayo 1 y 2 se empaparon en ácido, mientras que los tubos de ensayo 5 y 6 no se empaparon en ácido.
La observación en la habitación oscura mostró que Enterobacter aerogenes en el tubo de cultivo EC-MUG tenía una fluorescencia obvia en comparación con el agua destilada. En la observación real, esta fluorescencia es relativamente débil, pero aún así se producirá. Por lo tanto, la fluorescencia producida por los tubos de ensayo ordinarios y el agua destilada es insignificante, pero es un hecho experimental que el propio reactivo produce una cierta cantidad de fluorescencia.
Por lo tanto, para reducir la falta de experiencia de observación personal, se recomienda realizar observaciones comparativas etiquetadas durante el experimento, para que podamos tener un efecto intuitivo del yin y el yang fluorescentes en nuestras mentes.
Los coliformes termotolerantes que se muestran arriba son cepas laborales detectadas en el trabajo diario. El laboratorio ha confirmado que pueden producir coliformes de brillo metálico similares al óxido en placas de eosina-melan y que son coliformes resistentes al calor. Actualmente, esta cepa también puede crecer en turbidez en medio EC-MUG a 44,5°C.
Bajo el fondo de una lámpara fluorescente, utilizando la onda de luz ultravioleta de 366 nm de tres lámparas ultravioleta para observar, cada tubo de ensayo tiene una ligera luz azul, pero la observación visual real no es muy fuerte. Las fotos tomadas con teléfonos móviles muestran un ligero efecto fluorescente y E. aerogenes parece más oscura. Se puede determinar que los 10 tubos de ensayo son negativos para E. coli.
La imagen de arriba muestra el efecto de fluorescencia EC-MUG de Enterobacter aerogenes y cepas coliformes termotolerantes en funcionamiento en el cuarto oscuro. Las fotos tomadas con teléfonos móviles muestran una fuerte fluorescencia, pero el efecto visual real es débil. Sin un control positivo para comparar, se puede confundir fácilmente con un resultado positivo de E. coli. Sin embargo, si se observa en una habitación oscura, no hay diferencia entre los coliformes resistentes al calor y Enterobacter aerogenes, y el resultado también puede considerarse negativo.
Se compararon los efectos de fluorescencia de Enterobacter aerogenes y coliformes termotolerantes de laboratorio después del cultivo a alta temperatura con EC-MUG. Enterobacter aerogenes no puede crecer a altas temperaturas, el líquido es transparente y el sustrato fluorescente no se puede descomponer. La E. coli termófila de nuestro laboratorio puede crecer a altas temperaturas, por lo que el líquido es turbio. Sin embargo, esta cepa de trabajo no descompone el sustrato fluorescente MUG en el medio de cultivo para liberar el producto fluorescente. En comparación con Enterobacter aerogenes (cepa estándar disponible comercialmente), se consideró que tenía fluorescencia negativa, por lo que la cepa de coliformes termófilos en nuestro laboratorio puede pertenecer a Klebsiella termorresistente. (Los coliformes termotolerantes, también conocidos como coliformes fecales, están compuestos de Escherichia y Klebsiella resistente al calor. No es un nombre de clasificación bacteriológica, sino un término en el campo de las bacterias higiénicas.)
? La siguiente imagen muestra el efecto del cultivo EC-MUG utilizando dos reactivos diferentes en el mismo tubo de ensayo tratado:
Observe la imagen del efecto de fluorescencia en una habitación oscura. El contraste entre el yin y el yang de los productos Beijing Luqiao es. obvio.
Bajo las lámparas fluorescentes y las lámparas ultravioleta, el contraste entre el yin y el yang de los productos Beijing Land Bridge es evidente.
Al observar las representaciones de fluorescencia en el cuarto oscuro, los productos Qingdao Haibo tienen un claro contraste entre el yin y el yang.
Bajo una lámpara fluorescente, el efecto de fluorescencia de los productos Qingdao Haibo es obvio cuando se observa bajo una lámpara UV.
La imagen de arriba es una fotografía de los resultados del cultivo experimental bajo iluminación normal.
Al comparar los dos reactivos de Beijing Luqiao y Qingdao Haibo, se descubrió que los dos reactivos cultivan E. coli de diferentes maneras en tubos de ensayo, con diferentes factores de dilución, pero producen el mismo efecto de fluorescencia.
Discusión
3.1, literatura relacionada y resultados experimentales, el tubo de ensayo en sí producirá una pequeña cantidad de fluorescencia [3]. El tubo de ensayo utilizado en este experimento se dividió en dos partes. Parte de esto implica remojar los tubos de ensayo en ácido durante más de siete días y luego enjuagarlos con agua destilada. La otra parte se lavó directamente con agua del grifo y ambos tubos de ensayo se esterilizaron a 165°C durante más de 2 horas. Los dos tipos de tubos de ensayo contenían agua destilada de control, Enterobacter aerogenes (cepa estándar), E. coli termotolerante (cepa de trabajo) y E. coli (cepa estándar). No hubo diferencias en los resultados experimentales de la misma cepa en tubos de ensayo tratados con diferentes métodos, lo que indica que la fluorescencia que pueden producir los tubos de ensayo generales no tiene impacto en el experimento.
3.2. El reactivo del medio EC-MUG rebosará algunas sustancias fluorescentes después del cultivo. Si no hay un control positivo para comparar, se puede confundir con un verdadero positivo, lo que dará como resultado un resultado falso positivo. Por lo tanto, los experimentadores jóvenes o los trabajadores diarios deben llevar cepas estándar para experimentos simultáneos y observar los resultados experimentales.
3.3. El medio de cultivo EC-MUG producido por los dos fabricantes de reactivos tiene efectos de fluorescencia obvios a partir de los resultados positivos. En la operación real, cuando los resultados de la prueba de E. coli en el agua potable diaria son los mismos que los del control negativo, el resultado puede informarse como que no se detectó E. coli.
3.4. La detección de Escherichia coli GB/T 5750.12-2006 incluye el método de fermentación en múltiples tubos, el método de membrana de filtro y el método de sustrato enzimático de Escherichia coli.
El primer método recomendado es el método de fermentación en tubos múltiples, que se basa en la detección de lactopeptona fermentada por E. coli total y cultivo selectivo EC-MUG, lo que reduce la carga de trabajo y los gastos de trabajo del trabajo por lotes. En el control diario del agua potable, el primer método es más sencillo y fácil de implementar que el segundo. Comparado con el tercer método enzimático, es más económico y práctico. Por lo tanto, el primer método de fermentación con múltiples tubos todavía merece ser promovido en los trabajos de pruebas de rutina.
3.5. No existe diferencia significativa en los efectos de fluorescencia de diferentes diluciones de E. coli en medio EC-MUG. Por lo tanto, una vez completada la fermentación coliforme total, en las operaciones experimentales posteriores, las pipetas deben usarse en un tubo y no se pueden contaminar diferentes tubos de fermentación para evitar que el valor positivo sea demasiado alto.
Referencia
Norma de higiene del agua potable GB5749-2006. Beijing: China Standard Publishing House, 2007
[2], zzzzzz en agua, mmmmmmmj. Revista de Medicina Preventiva de Henan 2009 20(3):185-216.
[8] GGkkk. La vida bebe[J]. Tribuna de Medicina Preventiva, 2008, 14(12):1163-1164.
[9] HHHHHHHH et al. Encuesta agrícola del sur de China[J]. Salud y medicina preventiva, 2014, 25 (4): 11-13.
[J]gggg. Ciencia y tecnología ambientales, 2010, 23 (1): 67-70
[3]