Experimento biológico: método de prueba de pirógenos
Este método consiste en inyectar una cierta dosis del producto de prueba por vía intravenosa en el cuerpo del conejo y observar el aumento de la temperatura corporal del conejo dentro de un período de tiempo específico para determinar el límite de pirógenos contenidos. en el producto de prueba.
Conejos para uso de prueba. Los conejos para uso de prueba deben estar sanos y pesar entre 1,7 y 3,0 kg. Las conejas deben ser infértiles. Se debe utilizar el mismo pienso para la alimentación 7 días antes de la temperatura corporal prevista. Durante este período no se debe reducir el peso y no debe haber anomalías de ánimo, apetito, excreción, etc. Los conejos que no se hayan utilizado para la inspección de pirógenos; o los conejos en los que se considere que el producto de prueba cumple con las normas, pero el aumento de temperatura en el grupo alcanza los 0,6 °C o los conejos que no se hayan utilizado en el plazo de 3 semanas; ser probado 3 días antes de inspeccionar el producto de prueba ~Predecir la temperatura corporal dentro de los 7 días y hacer selecciones. Las condiciones para seleccionar la prueba son las mismas que cuando se inspecciona el producto de prueba, excepto que no se inyecta ninguna solución medicinal y la temperatura corporal se mide una vez cada 30 minutos y la temperatura corporal se mide 8 veces. veces está dentro del rango de 38,0 a 39,6 °C y es consistente con la temperatura más baja. Solo se pueden utilizar conejos cuyas temperaturas corporales difieran en no más de 0,4 °C para la inspección de pirógenos. Los conejos utilizados para la inspección de pirógenos, si se considera que el producto de prueba cumple con las regulaciones, deben descansar durante al menos 48 horas antes de estar disponibles para la segunda inspección. Si se considera que el producto de prueba no cumple, ya no se utilizarán todos los conejos del grupo. El número de veces que se utiliza cada conejo para la inspección general de medicamentos no debe exceder las 10 veces.
Preparación antes de la prueba: 1 a 2 días antes de la inspección de pirógenos, los conejos para la prueba deben estar en la misma temperatura ambiente tanto como sea posible. La diferencia de temperatura entre el laboratorio y la sala de cría no debe ser. mayor a 5 ℃ La temperatura de la habitación debe estar entre 17 y 25 ° C. Durante toda la prueba, se debe prestar atención a que el cambio en la temperatura ambiente no exceda los 3 ° C para evitar interferencias de ruido. Se impidió que los conejos comieran al menos 1 hora antes de la prueba y se colocaron en un dispositivo adecuado hasta que se completó la prueba. La temperatura corporal de los conejos debe medirse utilizando un termómetro con una precisión de ±0,1°C. La profundidad y el tiempo para insertar la sonda de temperatura o el termómetro rectal en el ano deben ser los mismos para cada conejo. La profundidad generalmente es de unos 6 cm y el tiempo no debe ser inferior a 1 minuto y medio. La temperatura corporal debe medirse una vez. cada 30 minutos, generalmente dos veces, y se debe medir la temperatura entre los dos tiempos. La diferencia no deberá exceder los 0,2°C, y el promedio de las dos temperaturas corporales se considerará la temperatura corporal normal del conejo. La temperatura corporal normal de los conejos utilizados ese día debe estar dentro del rango de 38,0 a 39,6 °C, y la diferencia en la temperatura corporal normal entre conejos no debe exceder 1 °C.
Las jeringas, agujas y todos los utensilios en contacto con la solución de prueba deben colocarse en un horno y calentarse a 250°C durante 30 minutos. También se pueden utilizar otros métodos adecuados para eliminar los pirógenos.
Para el método de inspección, tome 3 conejos adecuados y, dentro de los 15 minutos posteriores a la medición de su temperatura corporal normal, inyecte lentamente una dosis prescrita de la solución de prueba calentada a aproximadamente 38 °C desde la vena de la oreja y luego a intervalos Mida la temperatura corporal del conejo una vez cada 30 minutos según el método anterior, y luego reste 6 veces la temperatura corporal normal de una de las 6 temperaturas corporales, que es la temperatura creciente (°C) de la temperatura corporal del conejo. Si la temperatura corporal de uno de los tres conejos aumenta 0,6°C o más, o si la temperatura corporal de los tres conejos aumenta por debajo de 0,6°C, pero el aumento de la temperatura corporal total alcanza 1,4°C o más, se debe realizar otra selección. Se volvieron a analizar cinco conejos y el método de inspección fue el mismo que el anterior.
Los resultados determinaron que entre los tres conejos de la prueba inicial, el aumento de la temperatura corporal fue inferior a 0,6°C, y el aumento de la temperatura corporal total de los tres conejos fue inferior a 1,4°C; De los cinco conejos en la nueva prueba, solo un conejo tuvo un aumento de temperatura corporal de 0,6°C o más, y el aumento de temperatura corporal total de 8 conejos en la prueba inicial y la nueva prueba fue de 3,5°C o menos, y la prueba de pirógenos del Se consideró que el producto de prueba cumplía con las regulaciones.
Entre los 3 conejos en la prueba inicial, más de 1 conejo tuvo un aumento de temperatura de 0,6 ℃ o más o entre los 5 conejos en la nueva prueba, la temperatura corporal aumentó en 0,6 ℃ o más. se utiliza más de 1 conejo, o si el aumento de la temperatura corporal total de 8 conejos excede los 3,5°C en la prueba inicial y en la nueva prueba, la prueba de pirógenos del producto de prueba se considerará no conforme.
Cuando la temperatura del conejo aumenta a un valor negativo, se calcula como 0.℃.