Análisis RAPD de Angelica dahurica dahuricae
Métodos: Se analizó el ADN genómico de más de 17 individuos de cuatro poblaciones de Angelica dahurica silvestre y Angelica dahurica de Hangzhou utilizando 12 cebadores aleatorios. Resultados: * *Se amplificaron 40 sitios, incluidos 26 sitios polimórficos, lo que representa el 6,5%; el porcentaje de sitios polimórficos en Qihang Angelica dahurica mostró un bajo nivel de variación genética. El análisis RAPD mostró que la distancia genética entre Qi y Qi (0,160) era menor que la distancia genética entre la población de Qi y diferentes poblaciones en Hangzhou, y era menor que la distancia genética entre Angelica dahurica salvaje y Qi y Hangzhou.
Conclusión: Angelica dahurica y Angelica dahurica pertenecen al mismo grupo, y son diferentes de la Angelica dahurica silvestre. Análisis de recursos de germoplasma salvaje de Angelica dahurica RAPD: Angelica dahurica es una medicina tradicional china de uso común. Según la historia y los hábitos de la medicina nacional, los materiales medicinales comerciales utilizados en los tiempos modernos son todos productos cultivados y se dividen en dos categorías: Qi (Yu) Angelica dahurica y Hang (Sichuan) Angelica dahurica. Dado que aún no se ha aclarado realmente el origen de la planta silvestre original, no existe una conclusión unificada sobre la identificación del nombre de la especie Angelica dahurica. Según informes de la literatura relevante [1], Qiyu Angelica dahurica y Angelica dahurica distribuidas en el noreste son la misma planta, llamada Angelica dahurica (Fisch.) Bentham. Ethook. , mientras que Hangzhou Angelica dahurica (Sichuan) se nombra como una especie independiente o variante de Angelica dahurica. Por lo tanto, realizamos un análisis RAPD en las tres especies mencionadas de Angelica dahurica, Angelica dahurica y Angelica dahurica, y discutimos su parentesco molecular y estado taxonómico, con el fin de proporcionar una base para la clasificación correcta de Angelica dahurica.
Reactivos y materiales del instrumento
1.1 Instrumento PROGENETHERMALCYCLER (British Techne Company); centrífuga de alta velocidad Micro-MB3616 (American IEC Company); medidor de transmitancia ultravioleta multifuncional UV-I (Beijing New). Instituto de Aplicaciones Tecnológicas).
1.2 Reactivos enzima Taq (u-pbiotech.incusa); agarosa (Promega); DNTP (compañía Promega); CTA (compañía Sigma); los reactivos restantes son de Beijing Chemical; Reactivos analíticamente puros producidos en fábrica.
1.3 Materiales Tome hojas frescas de diversos materiales, como se muestra en la Tabla 1. Cantidad Nombre Número total de individuos Sitios polimórficos (%) 1 Hang 8 Jardín Botánico Medicinal de Zhejiang 40 20 (50) 2 Hang 4 Instituto de Investigación Botánica de Jiangsu Nanjing 40 23 (57,5) 3 Qi 5 Condado de Hebei Anguo 40 18 (45) 4 Xing' an 12 Universidad Farmacéutica de Shenyang 409 (22,5) Ambos.
Tabla 1 Comparación de fuentes de materiales experimentales y porcentajes de sitios polimórficos
Método experimental
2.1 Extracción de plantilla de ADN y determinación de concentración Tome algunas hojas frescas y colóquelas En un tubo de 1,5 mlep, agregar nitrógeno líquido y triturar con pinzas. Inmediatamente agregar 500 ul de solución de extracción 2 xctab [CTAl32%, Tris-HCI (pH 8,0) 100 mmol-.
1, EDTA 20UL MMOL L-1, NaCl 1.4 mol L-1, 2% L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L-L L-L AGREGA UN VOLUMEN ital (24:1), repetir la extracción una vez. Aspirar el sobrenadante, agregar tampón de precipitación [CTAB 1%, Tris-HCI (pH 8.0) 50 mmol L-1, EDTA 10 mmol L.. Dejar a temperatura ambiente por más de 30 minutos, centrifugar a 10000 r min-1 por 10 min, Retire cuidadosamente el sobrenadante. Lave una vez con etanol al 70% y etanol absoluto respectivamente, deseche el líquido de lavado y evapore. La concentración de ADN se midió utilizando un espectrofotómetro y luego se amplificó mediante PCR. El número y la secuencia de los cebadores utilizados se muestran en la Tabla 2. 2.2 El volumen total del sistema de reacción de amplificación RAPD es 50 UL, el cebador es 1 mmol L-1', el ADN total es aproximadamente 150 ng y se utiliza la enzima Taq.
2U, cada dNTPs 0,05 mmol L-1 Predesnaturalización de amplificación durante 5 min, 94 ℃ durante 40 s, 38 ℃ durante 45 s, 72 ℃ durante 45 s y luego extendido a 72 ℃ durante 5 min. Se sometieron a electroforesis 10 UL de productos amplificados en un gel de agarosa al 1,0 % usando tampón de electroforesis 1XTAE y se fotografiaron con detección UV (consulte la Figura 1).