¿Cómo se deben realizar las pruebas microbiológicas en pacientes con sospecha de tuberculosis?

Muestras: Las muestras se seleccionan en función del sitio de infección. Se puede tomar esputo, líquido de lavado bronquial, orina, heces, líquido cefalorraquídeo o torácico y ascítico. Para otras infecciones extrapulmonares, se puede recolectar sangre o secreciones de partes o células de tejido correspondientes. Microscopía de frotis directa: la muestra se unta directamente o se unta después de recolectar bacterias y se tiñe con tinción acidorresistente. Se puede realizar un diagnóstico preliminar si se encuentran bacterias acidorresistentes. La tinción acidorresistente generalmente utiliza el método de Ziehl-Neelsen. Para mejorar el teñido, se puede utilizar el método ik (kinyoun intensificado) para teñir. Después de teñir con fucsina de ácido carbólico durante la noche y desteñir con etanol de ácido clorhídrico al 0,5% durante 30 segundos, la mayoría de Mycobacterium tuberculosis tipo L también se pueden teñir. Para mejorar la sensibilidad de la microscopía, también se puede utilizar la tinción con auramina, y Mycobacterium tuberculosis mostrará una fluorescencia dorada bajo un microscopio de fluorescencia. Recolección de bacterias concentradas: recolecte las bacterias primero y luego inspeccione, lo que puede aumentar la tasa de detección. Los cultivos y las pruebas con animales también deben pasar por un proceso de recolección de bacterias para eliminar las bacterias extrañas. El líquido cefalorraquídeo, el líquido torácico y el líquido ascítico están libres de bacterias y pueden centrifugarse directamente para precipitar las bacterias. Las muestras contaminadas como esputo, líquido de lavado bronquial, orina y heces deben procesarse con naoh al 4% (la proporción de esputo y álcali es 1:4, y la proporción de orina, líquido de lavado bronquial y álcali es 1:1). ) durante 15 minutos, lo cual es demasiado tiempo. Mata fácilmente a Mycobacterium tuberculosis tipo L y a las micobacterias no tuberculosas. Primero agregue 0,5 ml de cada uno de ácido tánico al 5% y ácido acético al 5% a la muestra de orina y déjela reposar en una probeta medidora cónica, y luego recoja el sedimento para su procesamiento. El material procesado se centrifugó nuevamente. Tome el sedimento para teñirlo y examinarlo microscópicamente. Si se requiere más cultivo o inoculación animal, se debe neutralizar con ácido y luego centrifugar para precipitar. Cultivo de aislamiento: inocular el material de recolección bacteriano neutralizado en el medio de cultivo sólido, agregar un tapón de goma a la boca del recipiente y cultivar a 37 °C observar una vez por semana. Mycobacterium tuberculosis crece lentamente y normalmente tarda de 2 a 4 semanas en convertirse en colonias visibles. Para el cultivo líquido, el material de recolección bacteriana se puede agregar gota a gota al medio de cultivo que contiene suero y se verán partículas creciendo en el fondo del tubo en 1 a 2 semanas. Tomar el sedimento como un frotis puede obtener resultados rápidamente y puede usarse además para pruebas bioquímicas y de sensibilidad a medicamentos para distinguir Mycobacterium tuberculosis de Mycobacteria no tuberculosas. Los estudiosos nacionales han demostrado que Mycobacterium tuberculosis tipo L puede existir en las células sanguíneas o adherirse a la superficie celular. Estos pacientes suelen tener una velocidad de sedimentación globular acelerada inmediatamente después de la hemólisis con solución salina hipotónica, la inoculación de medio de cultivo hipertónico de Mycobacterium tuberculosis tipo L puede aumentar la tasa de cultivo positivo. Prueba en animales: Inyecte las bacterias recolectadas por vía subcutánea en la ingle del conejillo de indias. Después de 3 a 4 semanas, si los ganglios linfáticos locales están inflamados y la prueba de tuberculina resulta positiva, se puede realizar la disección. Observar si hay lesiones de tuberculosis en los pulmones, el hígado, los ganglios linfáticos y otros órganos y realizar exámenes morfológicos, culturales y de otro tipo. Si aún no hay aparición de síntomas dentro de 6 a 8 semanas, también se debe realizar un examen de anatomía. Diagnóstico rápido: Generalmente, el recuento bacteriano para el examen de frotis requiere 5x103~4/ml y el cultivo requiere 1x102/ml. Cuando el recuento bacteriano en la muestra es menor que este número, es difícil obtener un resultado positivo y el cultivo. lleva mucho tiempo. En la actualidad, la tecnología de amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se ha aplicado a la identificación del ADN de Mycobacterium tuberculosis. Solo se necesitan unas pocas bacterias por ml para obtener un resultado positivo, y el resultado se puede obtener en 1 o 2 días. Durante la operación, se debe prestar atención a la contaminación del equipo experimental para evitar falsos positivos. Además, las bacterias tipo L carecen de paredes y tienen un engrosamiento compensatorio de la membrana celular, y la lisozima comúnmente utilizada no puede romper la membrana celular para liberar ADN, lo que produce resultados de PCR falsos negativos. Pueden aparecer resultados positivos después de triturar lo suficiente con un rallador de tejido para romper las células. En la actualidad, las unidades calificadas utilizan el método bactec, utilizando medio de cultivo 7h12 que contiene ácido palmítico 14c como sustrato de fuente de carbono y midiendo la cantidad de 14c producida durante el metabolismo bacteriano para deducir si hay bacilos acidorresistentes en la muestra. Realizado en 5 a 7 días. Emitir un informe.