Breve descripción de los pasos de operación de la tecnología PCR

PCR es la abreviatura de reacción en cadena de la polimerasa (Reacción en cadena de la polimerasa) Es un método de síntesis enzimática de fragmentos específicos de ADN in vitro. El punto clave de este método es sintetizar dos cebadores de fragmentos pequeños que sean complementarios a ambos extremos del fragmento de ADN que se va a amplificar. La replicación del ADN se repite en un sistema de reacción que contiene cebadores, un sustrato de nucleótido plantilla de ADN que se va a amplificar y ADN polimerasa. Se puede obtener una gran cantidad de productos de amplificación en poco tiempo. El principio es que el cebador de la cadena de oligonucleótidos se extiende a lo largo de la plantilla bajo la acción de la ADN polimerasa, sintetiza dos cebadores complementarios a las secuencias en ambos lados del ADN objetivo y realiza una síntesis repetida del ADN objetivo in vitro.

Los principales pasos técnicos son:

(1) Desnaturalización del ADN y calentamiento para disociar la secuencia de ADN objetivo bicatenario en ADN monocatenario.

(2) Recocido de los cebadores con el ADN objetivo. Baje la temperatura adecuadamente para que los dos cebadores se unan para formar dos extremos 3' del ADN objetivo y se extiendan hacia el extremo 5'.

(3) Extensión del cebador: bajo la catálisis de la ADN polimerasa, el cebador se extiende a lo largo del extremo 3' del ADN objetivo hasta el extremo 5'. Después de la desnaturalización y disociación, la cadena de ADN recién sintetizada se puede utilizar como plantilla para hibridar con cebadores y, bajo la catálisis de la ADN polimerasa, puede guiar la síntesis de nuevas cadenas de ADN objetivo. Repitiendo los tres pasos anteriores, el fragmento de ADN objetivo se puede amplificar exponencialmente.