Red de conocimientos sobre prescripción popular - Conocimiento del confinamiento - La cromatografía de intercambio iónico separa mezclas de aminoácidos según las propiedades de los aminoácidos. Separación e identificación de aminoácidos - cromatografía en papel 1. Propósito experimental: Dominar los métodos y principios de la cromatografía en papel de aminoácidos y aprender a analizar la composición de aminoácidos de la muestra a analizar. La cromatografía en papel es una cromatografía de distribución que utiliza papel de filtro como soporte inerte. Los grupos hidroxilo de las fibras del papel de filtro son hidrófilos y adsorben una capa de agua como fase estacionaria y el disolvente orgánico como fase móvil. A medida que la fase orgánica fluye a través de la fase estacionaria, las sustancias se separan mediante una partición continua entre las dos fases. La velocidad de movimiento de un soluto sobre el papel de filtro se expresa mediante el valor Rf: Rf = distancia desde el origen al centro de la mancha cromatográfica/distancia desde el origen al frente del disolvente. En determinadas condiciones, el valor Rf de una sustancia. es una constante. El tamaño del valor Rf está relacionado con la estructura y propiedades de la sustancia, el sistema disolvente, la calidad del papel de filtro cromatográfico y la temperatura cromatográfica. Este experimento utiliza cromatografía en papel para separar aminoácidos. Equipo experimental (1) Vaso de precipitados grande (5000 ml): 1 pieza/grupo (2) Microjeringa (100 L): 1 pieza/grupo. (3) Pulverizador: de uso común. (4) Placa de Petri: 1 pieza/grupo. (5) Papel de filtro para cromatografía (largo 22 cm, ancho 14 cm, papel de filtro Xinhua No. 1): 1 pieza/juego. (6) Regla y lápiz: trae el tuyo. (7) Secador de pelo: 1 pieza/juego. (8) Bandeja, aguja, hilo blanco: 1 juego/grupo. (9) Guantes: 1 par/juego. (10) Película plástica: para uso público. (11) Vaso de precipitados pequeño: 50 ml, 1 pieza/grupo. 4. Reactivos experimentales (1) Agente expansor: Poner 4 volúmenes de n-butanol y 1 volumen de ácido acético glacial en un embudo de decantación, mezclar con 5 volúmenes de agua, agitar bien, dejar reposar y estratificar, desechar el agua inferior. (2) Solución de aminoácidos: solución al 0,5% de 3 aminoácidos conocidos (lisina, fenilalanina, valina), solución al 0,5% de 1 aminoácido a analizar. (3) Revelador: solución de n-butanol con hidrato de ninhidrina al 0,1%. Reactivos experimentales 5. Operaciones experimentales Compruebe si la placa de Petri está seca y limpia, si no está limpia, lávela y colóquela en una estufa para secar a 120°C. (1) Balanza: corte un trozo grande de película plástica y colóquelo sobre la mesa, coloque el tubo de cromatografía o el vaso grande sobre la película plástica, luego invierta el vaso pequeño que contiene aproximadamente 20 ml de solución en el tubo de cromatografía o el vaso grande, y utilizar plástico. La película se sella y se equilibra durante 20 minutos. 2) Dibujo: Utilice guantes y tome un trozo de papel de filtro para cromatografía de unos 14 cm de ancho y 22 cm de alto. Utilice un lápiz para dibujar suavemente una línea recta A paralela al borde inferior a 2 cm del borde inferior del papel de filtro. Haga 4 marcas en la línea recta con un intervalo de 2 cm entre las marcas. Además, dibuje una línea recta B paralela al borde izquierdo a 1 cm de distancia del borde izquierdo, y dibuje una línea de escala (unidad: centímetros) en B con la intersección de las dos líneas A y B como origen, como se muestra en la imagen de la izquierda. (3) Manchado: use una microjeringa para tomar aproximadamente 10 ml de muestra de aminoácidos (la microjeringa debe lavarse con agua destilada antes de cada manchado para evitar la contaminación cruzada) y localícela en estas cuatro posiciones respectivamente. Exprima una gota y colóquela una vez. En la misma posición es necesario colocarla de 2 a 3 veces, de 2 a 3 ml/vez. Después de cada punto, use inmediatamente un secador de pelo para secarlo con aire caliente antes de colocarlo nuevamente para asegurar que se seque. El diámetro de cada punto extendido sobre el papel es el más grande. No más de 3 mm. Cada persona debe pedir 4 muestras, 3 de las cuales son muestras conocidas y 1 es la muestra a analizar. (4) Cromatografía: use aguja e hilo para coser el papel de filtro en forma cilíndrica. Los bordes de ambos lados del papel no pueden tocarse entre sí y permanecer paralelos, consulte la Figura 3-3. Agregue agente de extensión a la placa de Petri para que el nivel del líquido alcance aproximadamente 1 cm. Coloque el cilindro de papel de filtro manchado en posición vertical en la placa de Petri (con el extremo manchado en la parte inferior y el extensor horizontalmente aproximadamente 1 cm por debajo del segmento de línea A) y cúbralo. Vaso de precipitados grande, todavía sellado con film plástico. Comience a cronometrar cuando el extensor suba hasta la línea A. Mida la altura del extensor elevándose a intervalos regulares y complete la Tabla 3-1. Cuando suba a 15 ~ 18 cm, retire el papel de filtro, corte la línea, inmediatamente trace el solvente a lo largo de la línea con un lápiz y séquelo rápidamente con aire caliente con un secador de pelo. (5) Desarrollo del color: use un rociador para rociar uniformemente una solución de ninhidrina n-butanol al 0,1 % sobre el papel de filtro en una cocina ventilada y luego seque inmediatamente con aire caliente para revelar las manchas cromatográficas, como se muestra en la imagen de la izquierda. (6) Calcule los valores de Rf de varios aminoácidos y determine qué aminoácidos están en la muestra mixta. Cada persona publicará sus resultados experimentales en el informe experimental, consulte la Tabla 3-2.