¿Qué método debería utilizarse para el análisis de cromatografía en columna de gel de sílice en el futuro?

1. Pesaje. Para gel de sílice de malla 200-300, pese entre 30 y 70 veces la cantidad de muestra, si es extremadamente difícil de distinguir, también puede utilizar 100 veces la cantidad de gel de sílice H. La densidad aparente del gel de sílice seco es de aproximadamente 0,4. , así que pesa 40 g de gel de sílice y mídelo en un vaso de precipitados. También puedes tomar 100 ml.

2. Revuelva uniformemente. Utilice una varilla de vidrio para agregar el doble del volumen de solvente de gel de sílice seco y revuelva uniformemente. Si el eluyente es un sistema de éter de petróleo/acetato de etilo/acetona, mézclelo con éter de petróleo; si el eluyente es un sistema de cloroformo/etanol, mézclelo con cloroformo. Si no es homogéneo, hay demasiada agua en el disolvente, especialmente acetato de etilo/acetona, que debe secarse previamente con sulfato de sodio anhidro si no se utiliza con agua para la cromatografía de partición. Se secó cloroformo sobre cloruro de calcio anhidro para eliminar una parte del alcohol. Si la muestra es sensible a los ácidos, no se puede pasar a través de la columna con el sistema de cloroformo.

3. Empaque la columna. Tape el fondo de la columna con algodón. No es necesario utilizar arena de mar. Agregue aproximadamente 1/3 del volumen de éter de petróleo (cloroformo), colóquelo en la bola de almacenamiento, abra el pistón debajo de la columna y vierta el homogeneizado en el almacenamiento. bola a la vez. Durante la precipitación, se teñirá algo de gel de sílice en la bola de almacenamiento de líquido y el gel de sílice se lavará en la columna cromatográfica con éter de petróleo (cloroformo).

4. Una vez completada la precipitación, agregue más éter de petróleo y use una bomba de doble bola o una bomba de aire para presurizar el lecho de la columna hasta que el caudal sea constante. El lecho de la columna se comprime hasta aproximadamente 9/10 de volumen. Este paso debe realizarse independientemente de si se utiliza una columna de presión normal o presurizada, ya que mejorará en gran medida la separación y evitará las grietas causadas por la contracción del lecho de la columna a medida que la columna pasa a través de la columna.

5. Muestra. Están disponibles métodos húmedos y secos. No se requiere arena de mar. Después del muestreo, agregue una cantidad adecuada de eluyente y coloque una bola de algodón sobre la superficie del gel de sílice. Esto permite agregar grandes cantidades de eluyente de forma segura sin lavar la superficie de silicona.

6. Transporte y recogida de columnas. La cromatografía en columna es realmente una compensación entre difusión y separación. No es bueno si la intensidad de elución es demasiado baja. Se recomienda utilizar elución en gradiente. Ejemplos de recolección: 10 mg de tamaño de muestra, 1 g de sílice H, 0,5 ml recolectados como fracción; 1-2 g de tamaño de muestra, 50 g de gel de sílice (malla 200-300), 20-50 ml recolectados como fracción.

7. Utilice reveladores en aerosol más específicos. Si solo usa lámparas UV, perderá más producto. La sensibilidad a los rayos UV es generalmente de 1 a 2 órdenes de magnitud menor que la de los reveladores en aerosol de fondo.

8. Enviar espectro. El producto recolectado se seca por centrifugación y generalmente es necesario recristalizarlo antes de enviarlo para análisis espectroscópico. Si la muestra es demasiado pequeña o líquida, se puede pasar a través de una pequeña columna de gel como último recurso para la purificación antes de enviar el espectro. Esto elimina el llamado pico de "sílice" en el espectro del hidrógeno, alrededor de 1,5 ppm.

Principio de separación por cromatografía en columna de gel de sílice

El principio de separación por cromatografía en columna de gel de sílice se basa en las diferentes propiedades de adsorción de las sustancias al gel de sílice. En general, son las sustancias con mayor polaridad. Se separan fácilmente mediante adsorción, las sustancias menos polares no se absorben fácilmente con gel de sílice. Todo el proceso cromatográfico es un proceso de adsorción, desorción, readsorción y redesorción.