Una breve introducción a la diferencia entre los medios DMEM y 1640.
Medio básico Eagle, diseñado por Eagle en 1955, BSS 12 aminoácidos, glutamina y 8 vitaminas. Simple y fácil de agregar, adecuado para diversas líneas celulares de paso e investigaciones especiales. Sobre esta base, las variedades mejoradas de medios de cultivo celular incluyen MEM, DMEM, IMDM, etc.
También conocido como medio mínimo esencial, fue modificado a partir del medio básico de Eagle (BME) en 1959. Se eliminan la lisina y la biotina y se aumenta la concentración de aminoácidos. Es adecuado para el crecimiento en monocapa de varias células y tiene variedades que pueden esterilizarse en autoclave. Es el medio más básico y más utilizado. Sin embargo, debido a su contenido nutricional limitado, no es adecuado para el cultivo y expresión de células específicas.
DMEM es el medio Eagle modificado de Dulbecco, diseñado originalmente para fibroblastos de ratón. La concentración de aminoácidos de DMEM es el doble que la de MEM y la concentración de vitaminas es cuatro veces mayor que la de MEM. La doble concentración de HCO3- y CO2 actúa como un mejor amortiguador. En la fórmula original, el contenido de glucosa era de 1000 mg/L. Posteriormente, para el crecimiento de ciertas células, el contenido de glucosa se ajustó a 4500 mg/L. Esto es lo que la gente suele llamar bajo y alto en azúcar.
El contenido bajo en azúcar es adecuado para cultivar células que dependen de la adhesión, especialmente para células tumorales que crecen rápidamente y tienen poca adhesión. El nivel alto de glucosa es más adecuado para cultivos celulares en suspensión de alta densidad y también es adecuado para cultivos de clones con mala adhesión, pero no se espera que se separe del punto de crecimiento original. También se puede utilizar para cultivar células de mieloma y células transformadas transfectadas con ADN en hibridomas. Por ejemplo, las células CHO expresan la vacuna contra la hepatitis B y las células CHO expresan EPO.
Guilber e Iscove modificaron el medio de Dulbecco para convertirlo en medio de Iscove para cultivar eritrocitos y precursores de macrófagos. El medio contiene selenio, aminoácidos y vitaminas adicionales, piruvato de sodio y HEPES. El nitrato de potasio reemplaza al nitrato férrico. IMDM también puede promover el crecimiento de linfocitos B de ratón, células B estimuladas por LPS, células hematopoyéticas de la médula ósea, células T y células de linfoma. IMDM es un medio rico en nutrientes que se puede utilizar para cultivos de proliferación rápida de células de alta densidad.
Moore y otros lo desarrollaron en el Roswell Park Memorial Research Institute en 1967 y lo diseñaron para cultivo de linfocitos. Contiene BSS 21 tipos de aminoácidos, 11 tipos de vitaminas, etc. Ahora también se utiliza para cultivos de células en suspensión, como mamíferos, células hematopoyéticas especiales, leucocitos normales o malignos, células de hibridoma y otros linfocitos como K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, linfoma de células T. Células y cultivo de células epiteliales HCT-15.
Diseño del jamón de 1963, contiene oligoelementos, se puede utilizar cuando el contenido en suero es bajo y es apto para cultivo clonal. F10 es adecuado para células diploides humanas y de hámster, especialmente cultivos de células de líquido amniótico.
Ham's F12 está diseñado para clonar células CHO en bajas concentraciones séricas y ahora se usa ampliamente para el análisis de tasas de formación de colonias y cultivos primarios. F12 también se puede mezclar con DMEM en volúmenes iguales para obtener productos con alta concentración y diversos ingredientes. Este medio se ha utilizado en muchos cultivos primarios y líneas celulares que son más difíciles de cultivar. Debido a que es rico en nutrientes y puede utilizar menos suero, a menudo se utiliza como medio basal para medios sin suero.
1950 Morgan et al. diseñaron un medio de cultivo celular químicamente definido, denominado M-199. Además de BSS, contiene 53 componentes y es un medio de cultivo integral utilizado principalmente para el cultivo de fibroblastos de embriones de pollo. Este medio debe complementarse con suero para apoyar el cultivo a largo plazo. M-199 se puede utilizar para cultivar células de diversos géneros, así como células transfectadas. Ahora se utiliza ampliamente en virología y producción de vacunas.
1959 MeCoy está diseñado para células de sarcoma y contiene BSS 40.
Puede apoyar el crecimiento de una variedad de trasplantes primarios (como médula ósea, piel, pulmones, bazo, etc.). ), utilizado principalmente para el cultivo de biopsias de tejido, algunos cultivos de linfocitos y apoyo al crecimiento de algunas células difíciles de cultivar. Por ejemplo, fibroblastos del sarcoma de rata de Janssen, linfocitos humanos, HT-29, BHL-100 y otras células epiteliales.
El medio L-15 es adecuado para el cultivo de células tumorales de rápida proliferación y se utiliza para cultivar líneas celulares tumorales sin CO2. El medio utiliza un sistema tampón de fosfato, la composición de aminoácidos se mejora aún más y la galactosa reemplaza a la glucosa.
No existen estándares determinados para la selección de medios de cultivo. Hay algunas sugerencias como referencia:
(1) Se debe utilizar el medio de cultivo utilizado para establecer una determinada línea celular. para cultivar este tipo de línea celular de elección. Puede consultar los materiales de referencia o consultar al comprar líneas celulares. También puedes buscar en los sitios web de algunas empresas biológicas. Por ejemplo, hay una herramienta de base de datos de líneas celulares en el sitio web de Invitrogen. Seleccione el tipo de célula que le interesa y aparecerán medios, sueros y reactivos de transfección recomendados, a veces con pasos de transfección optimizados, lo cual es muy conveniente.
(2) Es posible que desees probar otros medios de cultivo utilizados habitualmente en los laboratorios. Hay muchos medios disponibles para una variedad de células.
(3) Seleccionar el medio de cultivo según las características de la línea celular y las necesidades del experimento. Por ejemplo, para líneas celulares de ratón, elija RPMI1640.
(4) Cultive las células objetivo en diversos medios, observe su estado de crecimiento y juzgue por la curva de crecimiento, la tasa de formación de colonias y otros indicadores, y seleccione el mejor medio de cultivo según los resultados experimentales. Este es el método más objetivo, pero es más engorroso.