Preparación de muestras para electroforesis
Se puede moler directamente en nitrógeno líquido y otros pasos deben ser básicos. Lo mismo
1. Materiales y Métodos
Los líquidos centrifugados de los cinco tejidos de la carpa cruciana: corazón, hígado, músculo, cerebro y suero**** fueron analizados mediante electroforesis.
Utilizando poliacrilamida como soporte de electroforesis, las concentraciones del gel de concentración y del gel de separación preparados se muestran en la Tabla 2.
Nombre del reactivo Cantidad de cada reactivo necesaria para preparar 20 ml de gel de separación de diferentes concentraciones/ml Cantidad de reactivo necesaria para preparar 10 ml de gel de apilamiento
5% 7,50
Solución de almacenamiento de gel apilable 1,65
Tampón de gel apilable 1,25
1% TEMED 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 1,00
Agua bidestilada 12,07 6,50 8,74 5,40 7,03
Mezclar uniformemente y poner en un desecador de vacío y evacuar durante 10 minutos
1%AP 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,05
Tabla 2 Preparación del gel para sistema por lotes
Para evitar que la LDH y sus isoenzimas se vean afectadas por los residuos de polimerización en gel (como AP, etc.), se pueden agregar algunas sustancias fenólicas al gel para evitar que la LDH y sus isoenzimas verse afectado por La influencia de los residuos de polimerización en gel (como: AP, etc.), algunas sustancias fenólicas, AP, etc.) se pueden agregar al gel, causando pasivación enzimática u otros efectos artificiales. Por lo tanto, la muestra debe ser pre. -calentado a 20mA antes de añadir la muestra durante media hora. Luego, apague la corriente, agregue cinco sueros tisulares de corazón, hígado, músculo, cerebro y suero y un volumen igual de mezcla de sacarosa-azul de bromofenol, prestando atención al orden de adición de las muestras. La electroforesis se realizó durante cuatro horas a 20 mA utilizando un tampón de electrodo Tris-Glicina. Después de la electroforesis, saque la placa de gelatina y colóquela en una solución de tinte reactivo para teñir, y luego enjuague con agua para quitar el tinte. La preparación de la solución de tinción reactiva se muestra en la Tabla 3.
Solución de almacenamiento NAD+ Lactato de sodio NaCl NBT PMS Solución salina tampón fosfato
Dosis/ml 4,0 2,5 2,5 10,0 1,0 5,0
Tabla 3 Preparación de la solución de tinción activa LDH