¿Por qué el ARN utilizado en la reacción RT debe disolverse en agua pero no en TE?

Tanto el TE como el agua destilada son aceptables. TE durará más después de que se disuelva.

1. Causas de la degradación del ARN La ARNasa endógena es la causa más importante de la degradación del ARN, porque las propias células humanas se degradan una vez cada decenas de minutos (¿20 minutos?), ya sea un tejido o una célula. Es una muestra líquida, se debe almacenar adecuadamente lo antes posible después de dejar el estado de vida óptimo de las células que contiene. La ARNasa exógena también es un factor que necesita atención. Los más comunes son el cabello, especialmente el cabello, el polvo, la saliva y los guantes de plástico. Para afrontarlos conviene usar gorros, mascarillas y guantes de goma esterilizados, y extraer el ARN en un lugar limpio y polvoriento. Dije anteriormente que la contaminación por ARNasa endógena es la clave, por lo que algunos camaradas no prestaron atención al hecho de que estos ARN protectores contra la ARNasa exógena también se extraen muy bien. Pero si no tienes suerte, la contaminación por ARNasa exógena tendrá un gran impacto.

2. Selección de muestras Cuando extraemos ARN, a menudo necesitamos su ARNm, y el nivel de expresión del ARNm está estrechamente relacionado con el estado de crecimiento de las células o tejidos. Cuando tomamos bloques de tejido, debemos evitar tomarlos. tejido necrótico y células. Debemos recolectarlos cuando estén en un período de crecimiento vigoroso (las células adherentes deben digerirse rápidamente y centrifugarse un poco más rápido. Incluso puede ingresar al paso de lisis directamente sin digestión: Además, también puede usar el método de agitar y golpear la botella de cultivo primero para producir las células y el cultivo. La unión de la botella disminuye, y luego usar una pipeta para canalizar el medio de cultivo para derribar las células. De esta manera, el metabolismo de las células no será significativo. Tenga en cuenta que durante el paso normal, debe prestar atención a si hay otras cosas además de digerir las células con tripsina. Método relativamente simple) (Además, también puede verter el medio de cultivo y agregar rápidamente el reactivo de lisis para comenzar a extraer el ARN. ).