¿Qué método puede mejorar la eficiencia de transfección de las células RAW 264.7?

Resumen de los métodos para transfectar células RAW 264.7 en placas de 6 pocillos utilizando el reactivo de transfección de ARN y ADN avanzado Zeta Life.

El protocolo experimental es el siguiente:

1. Preparación del ADN plasmídico.

1. La concentración de ADN plasmídico es de 700 ng/ul (Nota: ① Disolver). en agua bidestilada estéril o agua ultrapura; ② Sin endotoxina),

2. Proceso operativo

1. Inocular las células en una placa de 6 pocillos y luego transfectarlas.

2. Preparación del complejo: mezcle directamente el ADN plasmídico y el reactivo de transfección Zeta Life advanced DNA RNA ad 600150 en una proporción de 1:1 (12ug:12ul) y utilice una pipeta para aspirar durante 10-15 segundos. -tasa.

3. Añadir el complejo a la placa de cultivo celular en medio de cultivo completo, agitar suavemente y colocar en la incubadora para continuar con el cultivo (no se recomienda añadir el complejo a medio libre de suero. Esto Esta condición se discutirá más adelante).

4. 24 horas después de la transfección, las células se intercambian normalmente.

5. Detectar la eficiencia de transfección del ADN plasmídico mediante fluorescencia 48 horas después de la transfección.

La siguiente figura muestra fotografías de fluorescencia y de campo brillante de células 264,7 sin procesar transfectadas.

Tres. Introducción a las células RAW 264.7:

Células crudas de leucemia de macrófagos mononucleares de ratón 264.7. Esta línea celular se deriva de tumores masculinos inducidos por el virus de la leucemia murina Abelson. Los antígenos SIg, Ia y Thy-1.2 de superficie fueron negativos. Esta línea celular no secreta partículas virales detectables y es negativa en el ensayo de formación de manchas XC. Puede beber rojo neutro y tragar partículas de látex y zymosan. Descompone los glóbulos rojos de oveja y las células tumorales de forma dependiente de anticuerpos.